РЕСПИРАТОРНО-СИНЦИТИАЛЬНАЯ ИНФЕКЦИЯ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА Respiratory Syncitial Virus Infectious

52, 79).

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инфекцию регистрируют в любое время года, но наивысшая заболеваемость отмечается осенью и ранней зимой. Увеличение числа клинически больных животных наблюдают примерно через 30 дн после прибытия в хозяйство новой партии скота, о чем свидетельствует 4-кратный и более подъем титров АТ. Симптомы РСБ проявляются слабо и могут быть не замечены. Если болезнь прогрессирует, наблюдают кашель, повышенное слюноотделение, серозное истечение из носа, учащенное дыхание, инфекция может протекать и как острая респираторная болезнь на фоне высокой температуры тела и диагностируется как эмфизема легких или интерстициальная пневмония. Болезнь длится от 3 до 10 дн и, как правило, заканчивается выздоровлением. В большинстве случаев процесс ограничивается повышением температуры, катаром верхних дыхательных путей и серозным ринитом (17, 53, 61, 64). Тяжелую бронхопневмонию с высокой температурой (до 41,5°С) наблюдают крайне редко. У молодняка болезнь, как правило, продолжается не более 3-5, у взрослых животных - 8-10 дн. Помимо того, РСВ вызывает пневмонии и аборты. В Англии описан падеж телят при острой пневмонии, вызванной РСВ. При гистологическом исследовании респираторных путей у погибших телят обычно выделяют гигантские синцитиальные клетки в бронхиолах, дегенерацию и некроз эпителиальных клеток бронхиол и легочной ткани, явления клеточной инфильтрации (62).

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Существует два типа синцитиальных вирусов КРС: 1) синцитиальный вирус, тесно связанный с клетками. Отличается серологически от РСВ КРС (BRSV); 2) BRSV выделен в ряде стран при респираторных вспышках болезни среди КРС. Впервые его выделили в 1969 г. в Бельгии Веллмане и Леннен из смывов верхних дыхательных путей больных телят (шт. V 220/69).

Морфология и химический состав. Геном РСВ достаточно изучен. Вирус содержит 10 генов, которые транскрибируются с образованием 10 мРНК (50). Определены нуклеотидные последовательности 7 генов (N-P, Р-М, M-SH, SH-G, G-F, F-M2 и M2-Z ) РСВ КРС (шт. А 51908). Оказалось, что все стартовые последовательности РСВ человека и РСВ КРС совпадают, кроме гена SH, который отличается заменой одного нуклеотида от гена SH ЧРСВ А2 и гена Z, который у РСВ КРС на один нуклеотид короче, чем у ЧРСВ (23, 43, 44, 70а, 80). С помощью монАТ выделена группа А и В с двумя подгруппами в каждой (13а). Вирус отличается от других парамиксовирусов большим количеством идентифицированных структурных белков, порядком генов, присутствием ГА и N, а также диаметром нуклеокапсида (10- 12 нм). Морфологические характеристики представлены на рис. 42 и 43.

В структуре РСВ КРС идентифицировано 9 (6) или 10 (36) полипептидов, 2 из которых -

G и F - гликозилированы и располагаются на поверхности вириона. Аминокислотная последовательность F-белка РСВ КРС (шт. 51908) оказалась гомологичной аминокислотной последовательности (81-99%) F-белка РСВ человека (39). У РСВ белок F содержит основную долю эпитопа, индуцирующего ВНА. Белок F состоит из 2-х субъединиц и исполняет функцию слияния, белок G-прикрепительную функцию (рецепторную). С помощью монАТ в структуре F-белка идентифицируют не менее 4-х АГ детерминант, 2 из которых причастны к слиянию с клеточной мембраной (77). В белке слияния F РСВ КРС выявлено 2 АГ-участка, один из которых ответственен за нейтрализацию (55). Гликопротеины G и F ответственны за индукцию (76) ВНА и образование протективного иммунитета. Внутренние вирионные АГ выявляются соответствующими монАТ. Изучена нуклеотидная последовательность генов неструктурных белков NS 1 и NS 2 РСВ (шт. А51 908). Оказалось, что ген NS 1 имеет длину 524 н, кодирует белок длиной 136 остатков и гомологичен генам NS 1 овечьего и человеческого вируса (подгрупп А и В) соответственно на 82, 67 и 65% на нуклеотидном уровне и на 89, 69 и 68% на аминокислотном уровне (61а). Ген NS 2 имеет длину 489 н., кодирует белок из 124 остатков и гомологичен генам NS 2 овечьего и человеческого РСВ на нуклеотидном уровне и на 87, 84 и 84% на аминокислотном уровне (58).

Устойчивость. Вирус очень нестоек к замораживанию. Два шт. РСВ КРС (Bov и Bov-x) оказались чувствительны к низким значениям pH. При 4°С он сохраняет активность в течение 1нед и при -70°С до 2 мес. Температура 56°С полностью разрушала его инфекционную активность в течение 30 мин. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, дезоксихолату, трипсину (19).

Антигенная структура. РСВ не содержит нейраминидазы. Содержит 2 растворимых КСА - А и В. АГ А , кроме того, индуцирует образование ВНА. Вирус также имеет структурный белок слияния - Fo белок. Определена последовательность аминокислот в белке Fo. Своеобразный ключ к расшифровке структурной организации РСВ - использование монАТ. С их помощью было показано, что гликопротеины F имеют решающее значение для формирования защитного иммунитета Гены, кодирующие гликопротеины и F, клонированы и расшифрована их нуклеотидная последовательность. Выявлены и описаны полипептиды, нуклеотиды и компоненты РСВ, пригодные для изготовления диагностических реагентов - вакцин против РСИ КРС. Выделенные полипептиды включают в себя короткие полипептиды, связанные с нейтрализующим эпитопом к эпитопам белка слияния РСВ или с нейтрализующими эпитопами G-белка (37). Благодаря применению монАТ были выявлены два подтипа РСВ, которые в антигенном отношении отличаются от подгрупп РСВ человека . Белки NP, М, Р и F, но не G, у РСВ КРС и РСВ человека имеют общие эпитопы. Среди изолятов РСВ КРС наибольшие варианты в мол.м. обнаружены у Р и F белков (15). Для типирования штаммов РСВ используют метод белкового профиля, основанный на определении электрофоретической подвижности Р-белка (фосфопротеина). Данным методом 75 штаммов разделены на 2 группы. У вирусов 1 группы, содержащей в качестве прототипа шт. Ланг, наблюдались минимальные вариации в подвижности Р белков. У вируса II группы, содержащей в качестве прототипа шт. СН 18537, Р белки негомогенны по подвижности. Указанные 1 и II группы белков соответствуют А и В подгруппам (75). Получено 5 монАТ к РСВ КРС, специфичность которых была изучена с помощью иммуноблотинга н эпитопного анализа. Эти АТ специфичны в отношении белка слияния РСВ, который имеет 2 антигенных участка, один из которых ответствен за нейтрализацию (55, 67,69).

Антигенная вариабельность и родство. Установлено АГ-различие между некоторыми штаммами, выделенными от человека и обезьян. Все штаммы РСВ КРС родственны штаммам РСВЧ. Основные АГ-различия между РСВ человека и КРС выявлены в гликопротеине G (50). Белки слияния этих вирусов гомологичны на 83-84% (48). Сыворотки крови морских свинок, привитых субъединицами РСВ человека и КРС, обладают хорошей перекрестной реактивностью и нейтрализует РСВ как человека, так и КРС (16, 20, 66, 70).

Локализация вируса. Изучена недостаточно. На 3-6-й день после инфицирования в мазках-отпечатках со слизистой оболочки носа методом ИФ обнаруживают специфический АГ, а при окраске их - гигантские клетки с включениями. РСВ КРС выделяли из конъюнктивально-назальных смывов, в культуре клеток ПЭК. Данных о локализации вируса, виру- семии и вирусовыделении у естественно больных животных нет. Возможно длительное ви- русоносительство. Нередко вирус выделяют от новорожденных телят. Из организма больных животных во внешнюю среду вирус выделяется с носовым экссудатом и выдыхаемым воздухом (24).

Антигенная активность. Вирус вызывает образование ВНА у человека, обезьян, хорьков, морских свинок и лошадей. ВНА были выявлены с 8-го по 14-й день у телят, свободных от материнских АТ. Отмечена линейная корреляция между титрами КСА и ВНА. Сыворотки морских свинок и хорьков проявляют слабую нейтрализующую активность, которая усиливается после добавления к ним комплемента. Однако сыворотки крови лошади достаточно активны и без добавления его. РСИ может развиться на фоне циркулирующих АТ. АТ играют защитную роль при наличии их в титрах не ниже 2 lg. Колостральные АТ к РСВ не предохраняют телят от инфекции. ВНА у экспериментально зараженных животных выявляются на 6-й день с максимальным титром на 13-15-й день (25,26, 70).

Экспериментальная инфекция. При интраназальном заражении телят РСВ в дозе 7,5-101 БОЕ на 5-й день развивалось слезотечение, истечение из носа, учащенное дыхание, угнетение и лихорадка, а также выраженная ингибиция миграции лейкоцитов периферической крови. Ингибиция достигала максимума к 2-3-му дню после заражения. Мигрирующие клетки представляли собой полиморфноядерные лейкоциты периферической крови, которые чувствительны в реакции задержки миграции. У зараженных интраназально и интратрахе- апьно телят в месячном возрасте через 3-5 дн вирусный АГ выявляли методом ИФ в цитоплазме зараженных клеток трахеи и бронхов, иногда в альвеолярных макрофагах и клетках, а также эпителиальных клетках носовой полости, носоглотки и бронхиол. Развившиеся у за- :раженных телят бронхиты и трахеиты характеризовались, помимо некроза, гиперплазией эпителиальных клеток, образованием клеточных синцитиев. Значительно реже наблюдали риниты, бронхиолиты и интерстициальную пневмонию. На 30-й день после заражения изменения исчезали. Таким образом, экспериментальная РСИ у телят сопровождается обратимыми изменениями эпителия респираторных путей и усилением фагоцитарной функции макрофагов. Вирусный АГ выявляли в зараженных клетках бронхиол, вблизи клеточного детрита и просвета, протока в эпителии трахеи (60а). При внутрикожном введении появлялась местная реакция гиперчувствительности замедленного типа со второго дня с максимальным утолщением кожи между 2-м и 3-м дн после заражения. У зараженных телят РСВ выделяют из слизистой оболочки носа, бронхов и легких. Трудность изоляции его объясняется присутствием секреторных АТ. Наиболее чувствительной при изоляции РСВ оказалась культура клеток тестикул бычков (41). При заражении ягнят референтным шт. Номи и болгарским изолятом Антонова интратрахеальио и внутривенно удавалось вызвать клинически выраженное заболевание. Кроме того, экспериментальную инфекцию сравнительно легко воспроизводят на обезьянах (шимпанзе, мартышка), хорьках, норках и морских свинках. Хорошей моделью для изучения РСИ оказались новорожденные хорьки. Вирус можно выделить из трахеи и носовых ходов в течение 7-10 дн. Симптомов болезни не отмечалось, но у хорьков наблюдалось повышение температуры тела. На хорьках удалось провести более 25 пассажей, причем титр вируса достигал 4,7-6,9 lg ИД50. Шт. ММК7, выделенный от коровы при вспышке болезни в Японии в 1968-1969 гг., серийно размножался в мозге 1-дн мышей, хотя симптомов болезни у них не наблюдалось. В США выделен вирус (шт. FSJ-1), близкий, но не идентичный РСВ человека. Данный штамм широко распространен среди КРС в США.

Культивирование. РСВ КРС не размножается на КЭ, хорошо репродуцируется в первичных культурах клеток почки, тестикул, легких и селезенки КРС. Вновь изолируемые бычьи штаммы РСВ размножаются только в первичных культурах клеток почки, легких и тестикул эмбриона коров. Вирус обычно выделяют в течение 3-4 пассажей, так как в первых генерациях выраженных ЦПИ не развивалось. Фибробласты эмбриона человека, обезьян, перевиваемые клетки КВ, HeLa, ВНК-21 не чувствительны к бычьим штаммам РСВ. Последний культивировался в перевиваемых клетках почки КРС, клетках легкого и некоторых органов новорожденных телят. Он так же хорошо культивировался в культуре перевиваемых клеток слизистой оболочки носа КРС (линия М-57) в однослойной статической культуре и на микроносителях в перевиваемой культуре MDBK, а также диплоидных клеточных культурах щитовидной железы ягненка. Для культивирования РСВ X. Харламбиев и др. (41) использовали перевиваемые линии клеток почек и тестикулов телят, ягнят, хронически инфицированных вирусом лейкоза КРС. Флюоресцирующие клетки впервые становятся заметными в период между 16 и 18 ч и после заражения. Флюоресценция ограничивается цитоплазмой (71, 72). Максимальный титр вируса 103-104 ТЦД 50/мл выявляется на 6-7-й день после заражения. Добавление в питательную среду 2% сыворотки КРС без специфических АТ или 0,1 мг профлавина стимулирует развитие синцитиальных клеток, что способствует обнаружению ЦПД (56, 57, 59).

Гемагглютинирующие свойства. Респираторно-синцитиальный вирус не агглютинирует эритроциты КРС, овец, морских свинок, мышей.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больные животные. Инфекция передается воздушно-капельным путем. Считают, что естественная внутриутробная инфекция поддерживает циркуляцию в стаде РСВ. Нет данных о наличии его в сперме быков-производителей.

Спектр патогенности. Среди КРС клинически болезнь бывает выражена у телят. Особенно чувствителен к нему КРС герефордской породы. В 9 западных штатах США в 42% случаев с помощью PH обнаружены АТ к РСВ у снежных баранов. Для проведения PH использовали шт. Mohanty А 51908, изолированный от КРС. РСВ удается заразить овец и белохвостых оленей.