ЛЕЙКЕМИЯ КОШЕК Feline leukaemia

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Вирус вызывает у кошек лейкоз, анемию, гломерулонефрит, остеосклероз и иммунодепрессивный синдром. Различают эритроидный, миелоидный и лимфоидный лейкоз. Лимфоидный лейкоз может быть 4-х типов: вилочковый, полицентрический, алиментарный и подлинная лейкемия. Наиболее распространены тимусная лимфосаркома и лимфатическая лейкемия.

Кроме того, вирус вызывает ретикулосаркому и гранулоэритромонозную лейкемию, а в некоторых случаях аутоиммунный гломерулонефрит, некоторые формы анемии, инфекционный перитонит, гломерулонефрит, фибросаркому и, возможно, карциному молочной железы. Считают, что FeLV вызывает атрофию вилочковой железы и истощение лимфоидной системы, что приводит к нарушениям иммунологической компетентности. По чувствительности к FeLV кошки могут быть разделены на 6 классов. Горизонтальная передача FeLV может происходить либо эпигенетических, либо путём контакта.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Возбудитель лейкоза кошек - онкогенный онкорнавирус. Широко распространен в популяции кошек и может передаваться горизонтально (9). Ранее предполагалось, что поражая гемолимфо-ретикулярные клетки, он часто вызывает кошачью форму СПИДа (1).

Онкорнавирусы кошек можно разделить на эндогенные и экзогенные. Эндогенные вирусы (ССС и RDI 14) выделяются из клеток либо спонтанно, либо под действием различных индукторов передаются вертикально, неонкогенны, сенотропны. Они могут размножаться в клетках человека и приматов, не способны размножаться в клетках кошек. В геноме нормальных клеток содержится более 100 копий генома этих вирусов. По данным молекулярной гибридизации, вирусы RDI 14 и ССС очень сходны.

Экзогенные онкорнавирусы (FeLV и FeSV) способны репродуцироваться в клетках хозяина (экотропны), передаются горизонтально, высокоонкогенны.

Основной белок оболочки вируса FeLV представлен полипептидом с мол. м. 68кД, а оболочки вируса RDI 14 - 77кД. В геноме клеток домашних кошек содержатся нуклеоидные последовательности, родственные 2-м вирусам С-типа - эндогенному вирусу RDI 14 и экзогенному вирусу лейкоза FeLV. Геном клеток леопардовых кошек не содержит этих последовательностей.

Большинство взрослых кошек инфицированы экзогенными вирусами. Однако относительно низкий процент заболеваемости можно объяснить или развитием у кошек иммунитета в результате постоянной реинфекции малыми дозами вируса, или гибелью их от незлокачественных болезней, частота которых повышается за счёт вирусной иммунодепрессии. По gs-АГ эндогенные и экзогенные вирусы типа С кошек отличны друг от друга.

Морфология и химический состав. В 1964 г. Джаретт с сотр., заражая бесклеточным экстрактом котят, выделил вирус лейкоза кошек. Каваками с сотр. (1967), Рикард с сотр. (1968) и др. подтвердили эти данные. Харди с сотр. (1967) обнаружили вирус лейкемии кошек с помощью иммунодиффузии.

При центрифугировании вируса FeLV выделено 3 компонента - 75S; 35S и 4S, плотность в градиенте сахарозы 1,13-1,17 г/см3. Выявлено 10 полипептидов (VP1-VP10) с различной мол.м., процентным содержанием и локализацией в вирионе. По мол.м. АГ вируса лейкемии кошек разделены на 4 класса: 50, 30, 15 и 12кД. В структуре вируса различают белки, связанные с сердцевиной (рЮ, р12, р15 и р27), и 2 оболочечных белка - гликозили- рованный 70 кД (gp70) и негликозилированный 15 кД (р15) (10). Гликопротеин gp70 содержит единственный нейтрализующий эпитоп (2).

Антигенная структура.

BJIK содержит белки, сходные с белками вируса лейкемии мышей. Однако, в отличается от последних в данном вирусе АГ gs-1 обнаружен только у одного белка (14кД), а не у 3-х. Межвирионный АГ gs-З найден в вирусах лейкемии кошек и лейкемии мышей во фракции белка с мол.м. 34кД gs-АГ. Определяют его в РСК, РДП, ИФ.

Антигенная активность. Показана прямая зависимость между уровнем гуморальных АТ и выраженностью противоопухолевой резистентности, на основе чего делаются попытки создания эффективной вакцины против вируса FeLV.

Иммунный статус кошек определяют по уровню АТ в крови. В качестве АГ для обнаружения АТ служат вирус-ассоциированные АГ клеточных мембран (CSA-AT). Резистентность кошек к BJIK зависит, по-видимому, от количества циркулирующих АТ к вирусу FeLV. Кошки с титром АТ 1:32 и выше могут не проявить признаков болезни, но выделяют вирус. У клинически больных кошек АТ, как правило, не выявляются. Примерно 90% клинически здоровых кошек не имеют защитного титра АТ к вирусу FeLV и поэтому подверже- ; ны инфекции. АТ тестируются в непрямой реакции ИФ и розеткообразования. ВНА к гли- ' копротеину gp70 контролируют латентное инфицирование BJIK, вызывая его элиминацию 5

из организма кошек (10).

Антигенная вариабельность и родство. В 1969 г. был открыт вирус кошачьей саркомы (FeLV), близкородственный к ВЛК.

Экспериментальная инфекция. Изолированным вирусом лейкемии сравнительно легко воспроизвести лейкемию у котят (инкубационный период от нескольких недель до года). Для заражения вирус концентрируют. От больного котёнка вирус можно изолировать и воспроизвести экспериментальное заболевание у следующего животного. Патологические изменения характеризуются атрофией тимуса и других лимфоидных тканей. У некоторых кошек обнаруживают интеркуррентные инфекции. Развивающаяся лимфоидная малигнизация, так же как и атрофия тимуса, приводит животных к гибели либо с признаками лимфатической лейкемии, либо лимфосаркомы. У животного, заражённого вирусом лейкемии, можно наблюдать различные состояния клеток: клетки морфологически выглядят нормальными и не содержат вируса (1-й вариант), клетки трансформируются, но не содержат вируса (2-й вариант); клетки морфологически выглядят нормально, но содержат вирус (3-й вариант), клетки морфологически представляются трансформативными, содержат и выделяют вирус (4-й вариант). При лейкемиях чаще встречается 3-й вариант, при саркоме - 4-й. Если же вирус лейкемии кошек инокулировать другим животным, можно наблюдать 2-й вариант. FeLV и FeSV онкогенны не только для кошек, но и для животных других видов, включая собак и нескольких видов приматов.

Вирусоносительство и вирусовыделение. Вирус первоначально попадает в кровь, оттуда в костный мозг, где происходит его репродукция, затем вновь переходит в кровь, что сопровождается персистентной виремией. У здоровых кошек AT FeLV обнаруживают только в 0,14% случаев, а у лейкозиых - в 90% случаев. Многие кошки могут быть заражены FeLV, но не болеть лейкемией.

Культивирование. Вирус лейкемии кошек (FeLV) развивается в культуре клеток фибробластов эмбриона кошек без видимых морфологических изменений. Выявить этот вирус можно методом смешанных культур, используя в качестве “культуры партнёра” линию клеток ХС, полученную из опухоли крысы, индуцированной вирусом саркомы птиц. Предварительно частично повреждают заражённый клеточный монослой, на который затем засевают индикаторные клетки ХС. Через 48 ч в зоне дефекта монослоя из индикаторных клеток образуются многочисленные гигантские многоядерные клетки. Кроме того, установлено, что FeLV способен размножаться в культуре клеток человека и собаки. Линия клеток FZ74, полученная от кошки с Т-клеточным лейкозом, продуцирует подтипы А, В и С ВЛК и комплекс вирусного АГ, ассоциированного с мембранами клеток.

Особенности внутриклеточной репродукции. В чувствительные клетки вирус проникает путём пиноцитоза, финоцитоза, филоцитоза и прямого проникновения. Вирус лейкемии кошек - первый лейкозный вирус-помощник, который преодолевает видовые барьеры. Он способен одевать в свою оболочку дефектный, т.е. неспособный самостоятельно заканчивать полный цикл размножения вирус мышиной саркомы, тем самым обеспечивая ему проявление трансформирующего (онкогенного) действия в культуре клеток эмбриона кошек. Полученный таким образом гибрид, т.е. вирус, состоящий из генома (нуклеиновой кислоты) вируса мышиной саркомы и оболочки вируса лейкоза кошек, трансформировал клетки эмбриона кошек и не трансформировал клетки культуры эмбриона мышей.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Установлена чрезвычайно высокая распространённость и способность к горизонтальной передаче вируса FeLV, сближающая его с обычными инфекционными вирусами. Поэтому вирус может передаваться от кошки к кошке контактно и аэрогенно (горизонтальный путь передачи), per os, через мочу, а также возможна передача блохами. Он находится не только в клетках гемопоэтической системы, но и в слизистых оболочках респираторных путей и ЖКТ и выделяется с мочой.

В отличие от вируса лейкоза мышей, ВЛК не передаётся вертикально потомству. Поэтому вследствие широко распространённого латентного вирусоносительства такие кошки могут служить источником заражения для контактирующих с ними здоровых особей.

ДИАГНОСТИКА

FeLV обнаруживается с помощью двух методов: ИФ и прямым выделением из плазмы.

Группоспецифический AT gs-1 вируса FeLV можно выявить в лейкоцитах периферической крови методом непрямой ИФ. С этой целью используют кровь и мозг исследуемых кошек. Метод позволяет выявить заражённость кошек ВЛК в 90% случаев. В США используют метод определения АГ ВЛК в лейкоцитах периферической крови. Инфекцию можно диагностировать методом ЭМ. Вирус изолируют из лейкемийных клеток, плазмы, костного мозга и выращивают в культуре клеток кошки, собаки и человека.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Иммунитет не изучен, однако доказана возможность вакцинации кошек против лейкемии, на основании чего в США создана эффективная вакцина. Доказана возможность латентного инфицирования ВЛК без развития лейкоза у кошек, но с формированием выраженного иммунитета (7), что явилось основанием к разработке средств специфической профилактики. Разработана рекомбинантная субъединичная вакцина против лейкоза кошек. В качестве АГ использовали негликозилированный гликопрогеин оболочки ВЛК подгруппы

А. Такой рекомбинантный белок включал белок оболочки (gp70) и первые 34 аминокислоты трансмембранного белка р15Е. Вакцина представляет собой очищенный белок, адсорбированный на ГОА, и содержит сапонин. У вакцинированных кошек образуются ВНА и развивается реакция на введение ВЛК: иммунизированные животные были защищены от вирусной инфекции (8). Помимо этого, для изготовления инактивированной формолвакцины использовали шт. КТ-FeLV-UCD-l, репродуцированный в линии клеток FL-74-UCD-1, на среде Лейбовица с 15-30% фетальной сыворотки КРС. Оптимальная концентрация формальдегида для инактивации вируса была равна 0,5-1,5%. Оптимальная протективная доза составляла 0,02-0,4 мг инактивированного белка вируса при внутримышечном введении. В качестве адъюванта используют неполный адъювант Фрейнда или ГОА. Вакцина предотвращала персистентную инфекцию (11).

Вакцинация кошек с последующей ревакцинацией через 2 и 11 нед субъединичной вакциной, включающей АГ подтипов А, В и С и мембранный АГ онкорновируса кошек защищала животных от развития инфекции при последующем их заражении вирулентным штаммом ВЛК. Она хорошо защищала кошек от персистентной инфекции и возникновения опухолей. Живая рекомбинатная вакцина оказалась безопасной и эффективной. У половины вакцинированных котят вакцинный вирус обнаружен в костном мозге со 2-й по 4-ю нед, но отсутствовал в периферической крови и не выделялся со слюной, мочой и калом. Он не передавался горизонтально невакцинированным котятам. Вакцина, приготовленная из клеток FL74, обработанных формалином, защищала котят от виремии и образования опухолей.

Вакцинация кошек оболочечными гликопротеинами ВЛК (gp70/85) сопровождалась образованием АТ, выявляемых в ИФА, но не в PH. При заражении вакцинированных котят ВЖ наблюдали персистентную инфекцию. Вакцинация кошек с последующей ревакцинацией через 2 и 11 нед субъединичной вакциной против ВЖ (Leucocell), включающей АГ подтипов А, В и С ВЛК, а также мембранный АГ (FASMA) онкорнавируса кошек также защищала животных от персистентной виремии и развития опухолей (6). В настоящее время не оставлены попытки создать генно-инженерную вакцину для профилактики лейкоза кошек. С этой целью гены nv и gag ВЛК экспрессировали в герпесвирусе кошек, неактивном по тимидинкиназе, и в бакуловирусе. Предложена схема вакцинации этими рекомбинантами, приводящая к 100% защите кошек от вирусной лейкемии (12).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1.

Голубев Д.Б. и др. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. Л,1976. 2.Сергеев В.А. Вирусные вакцины. Киев, Урожай, 1993. З.Сюрин В.Н.,Фомина

Н.В. Частн. вет. вирусол., Колос, 1979. 4.Сюрин В.Н. и др. Вет. вирусол., Агропромиздат, 1991. 5.Abkowitz J.L. Int J Cell Cion,1991, 9,4 :312. 6.HafferK.N. et.al. Vaccine, 1987, 5 :133. 7.

Hardy W.D. et.al. J Amer Vet Med Assoc, 1974, 165 :1020. 8.Mnarziani D.J. et.al. Vaccine, 1991,

9 :89. 9.Parkas D. et.al. Патент США, опубл. 06.10.92. lO.Pacitti A.M. et.al. Cell Biochem, 1986, Suppl 10a :209. ll.Pedersoen N.C. et.al. патент ЧСША 62737 от 28.4.81. 12.Wardley R.C. et.al. J Gen Virol, 1992, 73, 7 :1811.