ДИАГНОСТИКА

Выделение вируса

Подготовка материала. Очень важно правильно взять патологический материал для исследования. Его берут не менее чем с 5-10 участков пораженных тканей (везикул, папул и др.). Материал от больных животных, до этого обработанных моющими, дезинфицирующими р-рами, для исследования не пригоден. В лабораторию направляют мазки, сделанные из содержимого везикул больного животного, мазки-отпечатки оспенных поражений кожи, содержимое везикул, целые папулы и пустулы, иссеченные вместе с субэпидермальной тканью. Мазки высушивают на воздухе и упаковывают в целлофан. Везикулярную жидкость собирают в капилляры пастеровских пипеток, концы которых осторожно запаивают и помещают в пробирки с резиновыми пробками. Для гистологических исследований папулы и пустулы помещают во флаконы с 50%-ным р-ром глицерина и 10%-ным р-ром формалина. Не консервированный материал доставляют в термосе со льдом в тот же день. Необходимо помнить, что ВОС малоустойчив к теплу и кислой среде. Водный р-р глицерина (4-10%- ный) консервирует вирус в течение 4-5 лет. Лиофилизированный вирус сохраняется активным до 3 лет и более, особенно под вакуумом при низкой температуре. Для выделения вируса пробы взятого вируссодержащего материала растирают в ступке или готовят 10%-ную суспензию на физиологическом р-ре. Если материал консервировали глицерином, его предварительно отмывают физраствором. Суспензию центрифугируют 15 мин при 2000 мин'1. Надосадочную жидкость отсасывают, добавляют к ней 500 ЕД/мл пенициллина, 250 мкг/мл стрептомицина и 50 ЕД/мл нистатина, встряхивают и выдерживают 12 ч при 4°С.

Заражение животных. Биопробу ставят на 2-3-мес поросятах. Надосадочную жидкость (0,6 мл) втирают в участки скарифицированной кожи живота. Биопробу считают положительной при образовании по ходу насечек через 6-8 дн характерной узелково-пустулезной сыпи и при обнаружении элементарных телец при микроскопии. Биопробу ставят при неясных симптомах болезни и отрицательных результатах вирусоскопических исследований.

Индикация и идентификация вируса

Вирусоскопия. Свежую папулу протирают ватой, смоченной спиртом, срезают (лучше бритвой) и поверхностью среза делают несколько тонких мазков на предметных стеклах. Мазки подсушивают на воздухе и окрашивают методом серебрения (по Морозову). При вирусоскопических исследованиях пораженных участков кожи обнаруживают характерное расположение вирионов в виде россыпи. Однако отсутствие вирусных частиц в препарате еще не исключает оспу.

Э(У1. ЭМ пораженных участков кожи больных оспой поросят и обнаружение характерных вирусных частиц - один из методов экспресс-диагностики оспы. Для этого требуется всего около 30 мин.

Обнаружение специфических телец-включений. Развитие оспенных поражений в коже больных хорошо прослежено гистологическими исследованиями, результаты которых приведены в табл.

Таблица ХУП.2. Результаты гистологических исследований кожи

свиньи, больной оспой (по Касца и Гриземер, 1962) День после заражения Г идропи- рическая дистрофия Гипер

плазия Внутрикл

включен. Клеточная

ифильтрация Некро

зы Регенерация эпидермиса 3-й + + + - - - 5-й ++ ++ ++ - - - 7-й +++ +++ +++ + + - 11-й + + + +++ + 13-й - - - + + - 21-й - - - - - + Обозначения: (+, ++, +++) - выраженность реакции

(-) - отсутствие реакции или внутриклеточных включений

Диагноз на оспу считают положительным при наличии в гистологических препаратах ацидофильных включений и внутриядерных вакуолей в гиперплазированных кератиноцитах эпидермиса кожи. Цитоплазматические включения при ОС относятся к группе Б, т. е. к включениям, материал которых участвует в репродукции вируса.

Серологическая идентификация. Не разработана. Однако при необходимости возможна постановка РДП и более чувствительного теста - противоточного электрофореза (5).

Дифференциальная диагностика. Болезнь у свиней могут вызвать вирусы ОС, оспы коров, осповакцины и, по данным некоторых исследователей, оспы кур. Дифференциацию возбудителя, вызвавшего оспу у свиней, проводят на КЭ, культурах клеток органов и тканей кроликов или поросятах. Для этого используют 2-х поросят, переболевших оспой (подопытные), и 2-х здоровых (контрольные). Им втирают в скарифицированную кожу по 2 капли растворенной сухой осповакцины. Развитие оспенных поражений у подопытных и контрольных животных через 5-8 дн после нанесения вируса осповакцины указывает на наличие в хозяйстве оспы, вызванной натуральным ВОС. Отсутствие их у подопытных животных при положительной поствакцинальной реакции у контрольных свидетельствует о наличии у свиней оспы коров или осповакцины.

Дифференциацию возбудителей, выделенных от больных свиней с клинической картиной оспы, проводят на основании данных, приведенных в табл. XVII. 3 Более простым способом дифференцирования этих болезней является заражение кролика путем введения исследуемого материала в скарифицированную кожу. ВОС не вызывает у этих животных кожной реакции, в то время как вирусы осповакцины и оспы коров ее вызывают. Оба последних вируса можно выделить также путем заражения КЭ и культур клеток. Наличие телец- включений вдоль центральной “просветленной” околоядерной зоны в пораженных эпителиальных клетках является патогномоничным для ВОС (8).

Оспу у свиней следует дифференцировать от экзантем, появляющихся при авитаминозах, аллергии и нарушении обмена веществ, энзоотической бронхопневмонии, стрептококковом сепсисе, паратифе, чесотке, лишае, ВБС и везикулярной экзантеме. При экзантемах незаразной этиологии обычно не бывает лихорадки и биопроба отрицательная. Экзантема при чесотке, паратифе и других болезнях протекает без стадийного развития, как при оспе, а из патологического материала выделяют соответствующих возбудителей.