АФРИКАНСКАЯ ЧУМА ОДНОКОПЫТНЫХ

Africanische Pferdesterbe (Heiw.);Peste equine (франц.); Peste equina (исп.)

Африканская чума однокопытных (африканская чума лошадей) (A4JI) - вирусная болезнь, протекающая остро и подостро, характеризуется лихорадкой, отеками подкожной клетчатки и кровоизлияниями во внутренних органах.

До 1958 г. A4JI была распространена, в основном, в Африке. Начиная с 1959 г. инфекцию начали регистрировать в странах Ближнего и Среднего Востока. Осенью 1966 г. ее диагностировали в Испании. Экономический ущерб от этой инфекции слагается из падежа животных и затрат, связанных с проведением противоэпизоотических мероприятий.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Различают лихорадочную, легочную и сердечную, или отечную, формы болезни. Описана также смешанная форма A4JI.

Лихорадочная форма протекает сверхостро и характеризуется высокой температурой, конъюнктивитом, учащенным дыханием и ускоренным пульсом. Погибают животные на 5- 7-

й день после появления клинических признаков.

Легочная форма болезни протекает остро и регистрируется в период эпизоотии среди животных, очень чувствительных к инфекции. После инкубационного периода резко повышается температура тела, дыхание становится затрудненным, появляются одышка, сухой болезненный кашель и желтоватые истечения из носа. Погибают больные животные быстро.

Сердечная или отечная форма протекает подостро и отличается сильным отеком головы и шеи. Инкубационный период продолжается до 20 дн. Наблюдается расстройство сердечной деятельности. Почти все больные животные погибают. Патологоанатомические изменения соответствуют форме болезни. При легочной форме отмечают отечность легких и скопление жидкости в плевральной полости, а также инфильтрацию соединительной ткани у основания сердца.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирусную природу болезни впервые установили Александер и др. в 1934г.

Морфология и химический состав. Вирионы АЧЛ характеризуются икосаэдральным типом симметрии, диаметр их 70-80 нм, капсомеров 32. Капсид вириона состоит из одного слоя (Рис. 12). Вирус содержит 2-нитевую РНК. В градиенте сахарозы удается разделить ее на 5 различных по размеру фрагментов. РНК вируса состоит из 10-и сегментов, которые кодируют 6 структурных белков. Неструктурные белки кодируются сегментами 6, 8 и 10. Сегмент 5 кодирует неструктурный белок NS1. Показана высокая консервативность гена NS1, который рекомендуют использовать для гибридизации in situ с диагностической целью (19). У вируса АЧЛ наружный капсидный слой вириона образован полипептидами VP3 и VP5, Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции остальные полипептиды (VP1, VP2, VP3, VP7) находятся в структуре нуклеокапсида (6, 9). Белок VP2 - главный белок вируса A4J1, наиболее доступный на поверхности вириона (15). Главный сердцевинный белок VP7 вируса A4J1 серотипа 4 экспрессирован в клетках насекомых Sf, зараженных вирусом ядерного полиэдроза Autographa californica. Сердцевинный белок VP7 может быть использован для выявления АТ к различным АГ вируса A4J1.

Установлено АГ родство между вирусами A4J1 и другими орбивирусами: (КЛО и ЭГБО (10). Методом ЭФ в ПААГ с додецилсульфатом натрия анализировали структурные и неструктурные белки, индуцированные в клетках Vero серотипом 4 вируса АЧЛ. Выявлены 22 вирусспецифических полипептида. Методами иммуноблотинга и радиоиммунологически идентифицировано 4 больших (VP2, VP3, VP5 и VP7) и 3 малых (VP1, VP4, VP6) структурных белка и 4 неструктурных белка (Р58, Р48, Р21 и Р20).

Устойчивость. Нейротропные штаммы вируса инактивируются за 5-15 мин при 60°С. Штаммы, адаптированные к культуре клеток, сохраняются при 4°С до 90 дн. При хранении в культуральной среде при температуре от -20° до -30°С вирулентность вируса снижается. Инактивацию вируса при -22°С можно предотвратить добавлением 5% лактозы, сахарозы или глюкозы. В лиофилизированном виде вируссодержащий материал сохраняет инфекционную активность в течение нескольких лет. Вируссодержащая кровь больных лошадей, смешанная в равном объеме с р-ром оксалатфенол-глицерина, при 4°С остается инфекционной несколько лет. Нейротропные штаммы вируса, выращенные в культуре клеток MS и сохраняемые при 37°С, утрачивают свою активность через 40 дн. Прн хранении в условиях 25°С титр вируса в том же материале за тот же срок снижается на 1-2 lg, а при 4°С инфекционная активность суспензии сохраняется в течение 40 дн. Лнофилнзированная поли- штаммная вакцина в условиях 4°С сохраняет активность в течение 9 мес и лишь к 18 мес хранения теряет 2 lg своего исходного титра.

Инактивация вируса связана с присутствием в среде NaCl, СаС12, MgCl2. В р-рах без этих солей вирус длительно сохраняется при -20°С. Он стабилен в щелочной зоне с pH 7,0- 8,0,

устойчив к действию эфира и быстро инактивируется при pH 6,0. Чувствителен к УФ лучам, причем степень чувствительности различных в АГ - отношении штаммов вируса неодинакова. На этом свойстве основана методика их дифференциации штаммов АЧЛ. Штаммы, идентичные в АГ -отношении, одинаково чувствительны к УФ лучам. Формалин инактивирует вирус в концентрации до 1:8000. 50%-ный р-р глицерина используют как стабилизатор вируса, а 5-10%-ный сапонин - как ннакгнватор.

Антигенная активность. У естественно переболевших и искусственно зараженных лошадей, мулов, а также зараженных морских свинок, кроликов и овец вырабатываются ВНА КСА и ПА. Кролики дают высокоактивную сыворотку, пригодную для тнпирования отдельных штаммов вируса в PH. Положительную сыворотку для РСК (контрольную) получают от искусственно зараженных лошадей. Кровь берут через 30 дн после заражения. Для получения АГ мышат заражают в мозг (7, 8).

Антигенная вариабельность и родство. Существует 10 серотипов вируса АЧЛ, различающихся в перекрестной PH, РТГ А и иммунитете, и один общий КС АГ. Лошади, переболевшие чумой, становятся невосприимчивыми только к вирусу, вызвавшему заболевание. Прототипными штаммами выделенных АГ типов являются следующие: I-A501, И-ОД, III-L, IV-Vryh, V-VH, VI-114, VII-Karen, VIII-18/60, IX-7/6. Различие в АГ структуре вируса носит скорее количественный, чем качественный характер. Штаммы, принадлежащие к различным типам, содержат одинаковые АГ компоненты, но в различных пропорциях. При серий-

Глава 1. Family Reoviridae Реовирусные инфекции ном пассировании на лошадях вирус претерпевает иммунологические изменения, и лошадь, иммунизированная против определенного штамма, может не иметь иммунитета при заражении ее этим же штаммом, но прошедшим определенное число пассажей на лошадях.

Гемагглютинируюшие свойства. Висцеротропные эпизоотические и нейротропные вакцинные штаммы вируса АЧЛ агглютинируют 0,5% эритроциты лошади при pH 6,4.

Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. У больных лошадей вирус содержится во всех органах и тканях. В крови естественно больных лошадей вирус достигает титра 2-3 lg ЛД }0/m. Однако в наибольшем количестве он находится и в легких павших животных (до 3-4 lg ЛД 50/„л). У отдельных переболевших лошадей отмечается вирусоносительство и вирусовыделение в течение 3 мес.

Экспериментальная инфекция. Неиммунных лошадей удается заразить, если вводить вирус подкожно, внутрикожно, внутривенно, интратрахеально, интрапульмонально, внутри- брюшинно и per os.

Кроме АГ различий, штаммы различаются и по длительности инкубационного периода, наблюдаемого у мышей после внутримозгового заражения. Например, при заражении шт. 114 инкубационный период продолжается 46-80 ч, шт. А501 - 60-72 ч, шт. VR1 - 62-72, и т. д. Белым мышам (4-6-дн) материал в дозе 0,03-0,25 мл вводят интрацеребрально. Мыши гибнут в период между 4 и 22-м дн. В агональном состоянии у них берут стерильно головной мозг, готовят из него суспензию 1:10 на физиологическом р-ре (pH 7,5) и используют его для дальнейшего пассирования на этих же животных. Белые мыши восприимчивы как к висцеротропным, так и к нейротропным штаммам вируса АЧЛ, в то время как морские свинки чувствительны лишь к нейротропным штаммам. Хомяки чувствительны при введении вируса в сердце, а овцы - при заражении в мозг. На 8-й день после подъема температуры хомяков убивают и берут от них селезенку, содержащую вирус. Некоторым исследователям удавалось заражать собак скармливанием инфекционного материала. У КРС, овец и коз после заражения отмечают лишь незначительное повышение температуры.

Культивирование. Вирус АЧЛ размножается в организме лошадей, мулов, морских свинок, белых мышей, КЭ, а также в первичных культурах клеток почки хомяка, ягнят, в фибробластах КЭ, в перевиваемых клетках MS (клетки почки обезьяны), ВНК-21 (клетки почки хомяка), LMK (клетки почки молодой обезьяны) и VERO. Перед заражением культур клеток почки ягнят и эмбрионов овец удается выделять и культивировать вирус, выделенный из крови и органов больных и погибших от чумы животных. Пассирование вируса в тканевых культурах также сопровождается его аттенуацией с сохранением АГ и иммуноген- ных свойств.

Нейротропные вирусы размножаются в мозге КЭ, сохраняя свои нейротропные свойства, но не вызывая гибели эмбрионов. Висцеротропные штаммы вызывают гибель КЭ и с увеличением числа пассажей аттенуируются. Титр вируса в зараженных эмбрионах достигает максимума на 4-5-й день после заражения, затем быстро снижается. Наиболее пригодными для культивирования вируса АЧЛ оказались клетки линии ППК (почки поросенка, казанская линия) (8). Установлена возможность использования монослойных и суспензионных клеток ВНК-21 для изготовления вирус-вакцины против АЧЛ (4). Показана также возможность выращивания вируса АЧЛ различных серотипов в суспензии клеток ППК-666/17 в объемах 10-20 л при использовании питательной среды с гидролизатом белков крови КРС. В ходе пассирования вируса в течение 5 пассажей способность к репродукции и АГ специфичность вируса сохранялись (5). В инфицированных клетках MS и VERO вирус образует включения через 24 ч после заражения.