Поляриметрический метод.
Реактивы: 30%-ный раствор свинца ацетата (свинец уксуснокислый).
Оборудование: поляриметр.
Ход определения.
Моча не должна содержать белок; если он имеется, то мочу кипятят и фильтруют. Мочу обесцвечивают: к 10 мл ее добавляют 1 мл 30%-ного раствора свинца ацетата, подкисленного несколькими каплями уксусной кислоты, перемешивают и фильтруют. Исследование проводят в кислой среде, так как в щелочной свинец осаждает глюкозу. Глюкоза в моче стабильна при комнатной температуре и 4—8 °С в течение 2 ч, при минус 20 °С — в течение 48 ч.Трубку поляриметра наполняют прозрачным фильтратом, избегая попадания пузырьков воздуха, накрывают шлифованным стеклом, помещают в аппарат и через 2—3 мин проводят последующие операции, руководствуясь инструкцией к прибору. Работу прибора проверяют по свежеприготовленному раствору глюкозы с известной концентрацией.
Примечание. Определению глюкозы в моче мешают (5-оксимас- ляная кислота, стрептомицин, препараты тетрацик- линового ряда.
Клиническое значение. В моче здоровых животных концентрация глюкозы ничтожно мала и обнаружить или определить ее невозможно. Повышение содержания глюкозы в моче (глюко- зурия) отмечается при сахарном диабете, нарушении почечной фильтрации (почечная глюкозурия, «почечный диабет»), поражении печени, стрессах, гипертиреозе и многих других патологических состояниях. Наибольшее клиническое значение имеет контроль глюкозы в моче при диагностике и лечении сахарного диабета.
Обнаружение кетоновых тел. У здоровых животных в моче содержится незначительное количество кетоновых тел ((3-оксимасля- ная и ацетоуксусная кислоты, ацетон), которое качественными реакциями не обнаруживается.
Для обнаружения кетоновых тел в моче при их концентрации выше 10—12 мг/100 мл используют пробу Лестраде, Ланге, Ротера, экспресс-тест, кетур-тест, мульти- тестовые полоски, основанные на тесте Легала и др.Принцип. Натрия нитропруссид в щелочной среде реагирует с кетоновыми телами, прежде всего с ацетоуксусной кислотой и ацетоном, с появлением окрашивания от сиреневого до темно-фи- олетового. При этом чем больше в моче ацетоновых тел, тем интенсивнее окраска.
Проба Лестраде. Реактивы: 1 г натрия нитропруссида [№2(РеСМ02)(СЫ)5 • 2Н20];
20 г аммония сульфата [(N114)2804];
20 г натрия карбоната (№2СОз) безводного.
Компоненты мелко измельчают в фарфоровой ступке в однородный порошок, который помещают в склянку из темного стекла с пробкой. Хранят 1—2 мес.
Ход определения. Исследуют свежеполученную мочу на ферме или в лаборатории. На фильтровальную бумагу на кончике скальпеля наносят реактив и смачивают несколькими каплями мочи, через 30 с учитывают результат. Появление сиреневой, красной или темно-фиолетовой окраски свидетельствует о наличии в моче повышенной или высокой концентрации ацетоновых тел.
Проба Ланге. Реактивы: раствор натрия нитропруссида
- г/100 мл. Готовят перед употреблением;
уксусная кислота концентрированная;
25 %-ный раствор аммиака водного (НЩОН).
Ход определения. Исследуют мочу не позже чем через 3 ч после ее получения. В пробирку вносят 3—5 мл мочи, приливают 5—10 капель раствора натрия нитропруссида и 0,5 мл уксусной кислоты, смешивают и осторожно по стенке пробирки пипеткой наслаивают 2—3 мл водного раствора аммиака. Пробу считают положительной, если в течение 3 мин на границе сред образуется красно-фиолетовое кольцо.
Обнаружение кетоновых тел с помощью кетур-теста, мультитес- товых полосок или специальных таблеток проводят по инструкции, прилагаемой к набору.
Экспресс-метод заключается в том, что таблетку помещают на фильтровальную бумагу и смачивают несколькими каплями мочи.
Через 2 мин окраску таблетки сравнивают с цветной шкалой. Наличие ацетона вызывает фиолетовое окрашивание разной интенсивности. Согласно шкале, реакцию оценивают как слабоположительную, положительную и резко положительную.При использовании кетур-теста и мультитестовых полосок в моче обнаруживают ацетоуксусную кислоту в концентрации 5 мг/100 мл и выше, ацетон 40—70 мг/100 мл и более. Положительной пробой считают изменение окраски от бежевой до фиолетовой. Сравнение со шкалой дает ориентировочную оценку содержания ацетоуксусной кислоты, равного: (+) — около 5—40 мг/100 мл; (++) — около 40—100 мг/100 мл; (+++) — 100 мг/100 мл и выше.
Клиническое значение. Кетоновые тела не имеют почечного порога и выделяются с мочой в степени, пропорциональной нарастанию концентрации их в крови. Обнаружение кетоновых тел в моче является наиболее доступным и ранним тестом диагностики кетоза у коров, овцематок, буйволиц. При кетозе концентрация кетоновых тел в моче нарастает главным образом за счет ацетоуксусной кислоты и ацетона, которые вступают в реак
цию с натрия нитропруссидом. Наиболее высокая концентрация кетоновых тел в моче (около 800—1000 мг/100 мл) отмечается при остром тяжелом течении кетоза (И. П. Кондрахин). Кетоновые тела в моче в высокой концентрации обнаруживают при тяжелом течении сахарного диабета (кетоацидоз). Незначительное повышение кетоновых тел в моче можно установить при задержании последа, тяжелой хирургической инфекции и некоторых других патологических состояниях. При этом повышение кетоновых тел идет преимущественно за счет (3-оксимасляной кислоты.
Еще по теме Поляриметрический метод. :
- Методы профилактики развития резистентности паразитов к препаратам Биологические методы.
- Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).
- Методы изучения шмелей на фуражировочном участке: полевые методы исследования экологии и этологии шмелей
- Методы исследования
- Метод А.А. Шорыгина
- Метод биотических разрезов
- Методы биогеографии
- Метод типизации ареалов
- 6.4.3. Методы изучения генетики человека
- ГЕЛЬМИНТОЛАРВОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ
- Метод значимости биогеографических границ
- Методы изучения бентоса
- 6.4.3.2. Близнецовый метод
- 6.4.3.7. Биохимический метод
- Новые методы стратиграфии
- ПРИБОРЫ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ