Изучение аллергенных и раздражающих свойств. 

Для опытов используют несенсибилизированных животных. Местное и раздражающее действие препаратов изучают на морских свинках и кроликах

при одно- и многократном нанесении препарата на кожу и слизистые оболочки. При этом учитывают концентрацию препарата.

Наиболее простым в исполнении и достаточно объективными тестами могут быть "провокационные пробы". Процесс аллергизации химическими препаратами при их парантеральном введении активнее всего проявляется при соблюдении следующих условий: при 3-5 разовом поступлении аллергена; при введении аллергена с интервалом 3-5-7 дней; при соблюдении инкубационного периода продолжительностью не менее 14 дней; при количественном превышении разрешающей дозы аллергена над его суммарной дозой, используемой для сенсибилизации животного; при доведении общей длительности воспроизведения аллергического состояния до 30-40 дней.

Многократное, ежедневное введение препарата одними и теми же путями без соблюдения прерывистости приводит к преимущественному проявлению токсического эффекта.

Испытание аллергенных и раздражающих свойств проводят параллельно с подострым и хроническим опытами.

Воспроизведение анафилактического шока проводят с целью установления раздражающей дозы аллергена.

Морских свинок сенсибилизируют 5 инъекциями с 3-5-7-дневными промежутками. Интервалы подбирают так, чтобы общее количество дней на сенсибилизацию вместе с инкубационным сроком (14-21 день) составило 3040 дней.

С целью сенсибилизации организма подкожно вводят гаптены: лошадиную сыворотку по 0,3 мл 0,1-0,5 % раствор бихромата калия по 0,1-1,0 мл, сульфанол НП-1 и другие.

Расчеты доз и концентраций ведут с учетом методики применения препарата, веса и продолжительности эксплуатации животного.

шающей дозы должна быть равной или несколько превышать суммарную дозу, взятую для сенсибилизации. Концентрация раствора остается такой же, как при сенсибилизации.

При внутрисердечном методе введения симптомы анафилактического шока проявляются очень быстро в течение нескольких минут. Внутрибрю- шинная или подкожная разрешающая инъекция вызывает ослабленную или затяжную реакцию.

Оценка аллергенных свойств препарата: легкая форма, шок средней тяжести, тяжелая форма шока и шок со смертельным исходом.

Метод накожных аппликаций. Сенсибилизацию проводят много кратными аппликациями данного препарата (15-30) на один и тот же участок кожи в концентрациях, установленных для воспроизведения анафилактического шока. Об аллергенных свойствах препарата судят по развитию выраженного дерматита.

На выстриженный участок кожи размером 1,5х2 или 2х3 см наносят водный, спиртовой или ацетоновый раствор препарата, эмульсии либо мази на вазелиновой основе (0,1 мл на ч.), которую затем удаляют. При постановке капельных проб у морских свинок развивается аллергическая реакция замедленного типа, достигшая максимума через каждые 48-72 часа. В этой связи следует учитывать реакции каждые 24 часа. При наличии аллергенных свойств препарата на месте аппликации развивается эритема, отек кожи, геморрагии или некроз.

Для изучения раздражающего действия препаратов существует ряд методов.

Метод конъюнктивальных проб. Для его постановки одну каплю водного раствора вводят глазной пипеткой под верхнее веко морской свинке или кролику, а во второй глаз (контроль) - 1 каплю воды. Реакцию учитывают дважды: через 5 мин и спустя 24-48 ч. по покраснению конъюнктивы и по реакции склеры. Возможно развитие зуда (расчесывание лапками), острого оф- тальмита, истончения эпителия роговицы, набухание сосудов, отек конъюнк

тивы, дегенерация, лейкоцитарная реакция. При выраженном действии возможны ожоги 1,2, и 3 степени.

Метод погружения хвоста. Белых мышей или крыс фиксируют в специальных станках, изготовленных для данных целей.

Метод окраски с трепановым синим. Кролика фиксируют в спинном положении, на животе выстригают 6 полей 10x15 мм каждое. Кожу обезжиривают спиртом и наносят (втирают) препарат в необходимых количествах и концентрации (или различные препараты). На 2 поля наносят растворители препарата. Поверхность полей прикрывают марлевым тампоном, полиэтиленовой пленкой и фланелью (полотенцем). Через 15 мин кролику внутривенно вводят 1% раствор трипанового синего в дозе 1 мл/кг. Реакцию учитывают через 3-5 часов после нанесения препарата (равномерное окрашивание препарата - выраженного раздражающего действия, различимая голубая окраска - умеренного действия, слабо различимое голубое окрашивание - слабого действия, окраски нет - раздражающий эффект отсутствует).

Нанесение препаратов на кожу в виде растворов, эмульсий, суспензий и мазей производят на выстриженную (выбритую) и обезжиренную поверхность одно- и многократно.

По степени аллергизации препараты делятся на: сильные аллергены дают не менее 80% случаев реакций с быстрым развитием и выраженным проявлением клинико-морфологических проявлений; средней силы аллергены вызывают у 50-80% животных положительную реакцию; слабые аллергены - положительная реакция отмечается у животных менее 50% при слабом ее течение и отсутствии клинико-морфологических изменений.

При оценке кожной реакции пользуются следующей шкалой в баллах: - видимой реакции нет; - очаговая эритема по всему участку нанесения кашш, аппликация хвоста;

2- сплошное бледно-розовое пятно или сливающаяся очаговая эритема (красные пятна на розовом фоне); - сплошная эритема с ярко-розовым или красным цветом кожи; - инфильтрация и отёк кожи (утолщение кожной складки) при наличии или отсутствии эритемы; - эритема, выраженная инфильтрация, образование корочек.

Слабые, плохо проникающие через кожу аллергены, чаще вызывают

очаговую эритему, а хорошо всасывающиеся - сплошную.

Инфильтрация и отёк развиваются при интенсивной сенсибилизации, а ответная реакция в 5 баллов возникает при гиперергичееких реакциях.

При постановке конъюнктивальных проб реакцию оценивают по следующей шкале: - легкое покраснение слезного протока; - покраснение слезного протока и склеры в направлении к роговице; - покраснение всей конъюнктивы и склеры.

При отнесении препарата к сильным аллергенным, дальнейшие исследования его прекращают и делают заключение о нецелесообразности его применения в практике животноводства.

В тех случаях, когда исследуемое вещество является слабым или средним аллергеном это учитывают при разработке его лечебных и профилактических доз.