ПЦР с применением обратной транскрипции (RT PCR)

Для обнаружения и идентификации таких фитопатогенов как вирои- ды и РНК-содержащие вирусы классический вариант ПЦР-анализа оказывается неприменимым, поскольку Taq-полимераза не способна катализировать синтез ДНК на РНК-матрице.

Поэтому при диагностике данных патогенов используют еще один фермент, называемый РНК-зависимая ДНК- полимераза, или обратная транскриптаза (reverse transcriptase). Реакция с участием обратной транскриптазы приводит к образованию одноцепочечной кДНК, фрагмент которой затем амплифицируется с участием Taq-no- лимеразы.
ПЦР с обратной транскрипцией (Reverse Transcription PCR — RT PCR; ОТ-ПЦР) успешно применяется для детекции поражающих растения вирусов и вироидов, а так же наличия вирусов у тлей-переносчиков. Хорошо известно, что обнаружение и идентификация фитоплазм и вироидов, присутствующих в растениях в чрезвычайно малых количествах — весьма сложная задача, для решения которой могут быть использованы гибридизационный анализ (фитоплазмы) или возвратный гель-электрофорез (вироиды). Эти методы на несколько порядков менее чувствительны, чем ОТ-ПЦР.
При диагностике бактерий, грибов или оомицетов с помощью ОТ-ПЦР, ориентированного на определение мРНК, удается не только продемонстрировать их присутствие в растении, но и получить информацию об их жизнеспособности (см. также «БИО-ПЦР»).

86              Отметим, что процесс обратной транскрипции может протекать с уча
стием еще одного фермента — Tth-полимеразы, выделенного из другой термофильной бактерии (Thermus thermopilus). В диагностике вироидов и РНК-содержащих вирусов Tth-полимераза может, в силу некоторых своих особенностей, использоваться одновременно как для синтеза однонитевой ДНК, комплементарной РНК патогена, так и для амплификации целевого фрагмента ДНК. 

Еще по теме ПЦР с применением обратной транскрипции (RT PCR):

1. ОЦЕНКА СОСТАВА МЕТАНОГЕННЫХ АРХЕЙ В ТОРФЯНЫХ ПОЧВАХС ПОМОЩЬЮ ПЦР-ДГГЭ ТЕХНОЛОГИИ А.              К. Кизилова, М. В. Чистотин, И. К. Кравченко
2. Прямые и обратные прививки томата на дурман
3. О МЕТОДЕ «ОБРАТНОЙ ЗАДАЧИ» ИЗМЕРЕНИЯ ИНТЕНСИВНОСТИГАЗООБМЕНА НА ГРАНИЦЕ ПОЧВА/АТМОСФЕРА М. В. Глаголев, А. Ф. Сабреков
4. Учет с фиксированным уровнем точности и метод обратного биномиального выбора
5. Определение натрия хдорида (поваренной соли) обратным титрованием по методу Фольгарда
6. Глава 12 ЭКОНОМИЧЕСКАЯ И ЭНЕРГЕТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ УДОБРЕНИЙ
7. ПРИМЕНЕНИЕ ФОСФОРНЫХ УДОБРЕНИЙ
8. Куликова Наталья Александровна, Лебедева Галина Федоровна. Гербициды и экологические аспекты их применения: Учебное пособие., 2010
9. МЕТОДЫ ОПТИМИЗАЦИИ ПРИМЕНЕНИЯ УДОБРЕНИЙ
10. МИКРОУДОБРЕНИЯ И УСЛОВИЯ ИХ ЭФФЕКТИВНОГО ПРИМЕНЕНИЯ
11.   ПРИМЕНЕНИЕ РЕАКТИВОВ И ИХ ОЧИСТКА  
12. ПРИМЕНЕНИЕ УДОБРЕНИЙ
13. Применение дыма
14. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВАКЦИН И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИХ ПРИМЕНЕНИЮ
15. УСЛОВИЯ ЭФФЕКТИВНОГО ПРИМЕНЕНИЯ МАГНИЕВЫХ УДОБРЕНИЙ
16. ОПТИМИЗАЦИЯ ПРИМЕНЕНИЯ КАЛИЙНЫХ УДОБРЕНИЙ
17. Экономическая эффективность применения удобрений