2.2.2.1. Изучение распространенности и этиологической структуры Malassezia-инфекций среди собак и кошек

Этиологическая значимость грибов рода Malassezia при поверхностных заболеваниях животных (отитах и дерматитах) пристально изучается зарубежными исследователями на протяжении последних 15-20 лет [63, 169].

В отечественной ветеринарной микологии в этой области имеется существенный пробел — лишь единичные публикации затрагивают вопрос о клиническом значении грибов рода Malassezia [13], а целенаправленных исследований по распространенности и этиологии Malassezia-инфекций животных до сих пор фактически не проводились.

В рамках данного этапа было проведено обследование 187 животных, в т.ч.

Отбор патологического материала от больных животных, микологический анализ и интерпретация результатов проводились по методике, разработанной на предыдущих этапах исследования. Результаты микологического анализа патматериала от собак с клиническими проявлениями отита представлены на рисунке 4. НДГ 2,1%

Микроорганизм не изолирован

2,8'

Бактерии 14,7%

Malassezia pachydermatis + бактерии 25,2%

Рис. 4. Видовой состав микроорганизмов, изолированных от собак с клиническими проявлениями отита

Грибы рода Malassezia изолированы в целом из 115 изученных проб (80,4%). На основании морфологических признаков, а также способности к росту на питательных средах без липидов, все изоляты этого рода были отнесены к виду М. pachydermatis.

В большинстве случаев (52,4%) из изученных проб выделяли только М. pachydermatis, в 25,2% этот вид выделяли в ассоциации с бактериальной микрофлорой. В 2,8% М. pachydermatis выделяли в ассоциации с мицелиальными недерматофитными грибами (НДГ). Реже всего (2,0%) из слухового канала выделяли только НДГ, представленные родами Mucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria.

Полученные данные свидетельствуют о доминирующей роли М. pachydermatis в этиологии отитов у собак, как в качестве единственного возбудителя, так и в ассоциации с другими микроорганизмами, прежде всего бактериями. Клинические особенности Malassezia-отитов у собак будут рассмотрены ниже. Результаты микологических исследований патматериала от собак с кожными поражениями (дерматитами) представлены на рисунке 5.

Рис. 5. Видовой состав микроорганизмов, изолированных от собак с клиническими проявлениями дерматитов

Наиболее часто (40,7%) из кожных поражений собак выделяли недер- матофитные грибы, характеризовавшиеся широким видовым разнообразием. По частоте встречаемости превалировали грибы родов Alternaria, Aspergillus, Cladosporium, Scopulariopsis, Aureobasidium, Chaetomium, Acremonium.

Частота выделения бактерий также была значительной (25,9%), а грибы рода Malassezia выделены только в 14,8% случаев (все изоляты относились к виду М. pachydermatis). Частота выделения М. pachydermatis сопоставима с встречаемостью грибов-дерматофитов (11,1%), которые были представлены видами Trichophyton mentagrophytes и Microsporum canis. Из 7,4% проб микроорганизмы не изолированы.

При составлении клинической картины Malassezia-дерматитов у собак, помимо клинических проявлений, учитывали также локализацию патологического процесса на различных участках тела животных (рис.6).

Рис. 7. Генерализованный Malassezia-дерматит у собаки

50.0%

Рис. 6. Локализация патологического процесса при Malassezia- дерматитах у собак

В диагностированных случаях Malassezia-дерматитов у собак кожные поражения были локализованы на дорсальной или вентральной поверхности тела (в области паха, брюшины), на морде в области губ (см. рис. 8), в межпальцевых пространствах (рис. 9). Клинически поражения характеризовались ярко-выраженной эритемой, сальным жироподобным экссудатом, мацерацией кожи, образованием пустул.

Рис. 9. Локализация Malassezia-дерматнта у собаки в области свода стопы

Поражения кожи поверхности тела распространялись на значительную площадь, характеризовались гиперкератозом, лихенизацией, гиперпигментацией и образованием комедонов (рис.

Клинические проявления дерматитов, вызванных другими микроорганизмами (НДГ, бактериями и дерматофитами), существенно отличались от вышеописанных и выражались как правило в форме локализованных четко очерченных алопеций шерстного покрова, шелушащихся или покрытых корочками (сквамозные дерматиты).

Частота обращений владельцев кошек по поводу ушных заболеваний в период проведения исследований была невелика — всего было изучено 17 проб от кошек с клиническими проявлениями отита. Результаты микологического анализа патологического материала представлены на рисунке 10. Как демонстрирует диаграмма, дрожжевой гриб М. pachydermatis встречался относительно редко - в 11,8% случаев. Более существенную роль в этиологии отитов у кошек играли бактерии и ушные клещи (29,4% и 17,6%). В 41,2% случаев этиология заболевания очевидно носила неинфекционный характер.

Бактерии 29,4%

Рис. 10. Видовой состав микроорганизмов, изолированных от кошек с клиническими проявлениями отитов

Клинически Malassezia-отиты у кошек характеризовались эритемой, стенозом слухового канала, обильным выделением крошащегося темно- коричневого ушного секрета, зудом, расчесами ушных раковин (рис.11).

Рис. 11. Клиническая картина Malassezia-OTHTa у кошки (темно- коричневый ушной секрет, расчесы)

В результате проведенных исследований было установлено, что наибольшее клиническое значение грибы рода Malassezia имеют при ушных заболеваниях собак, проявляющихся в форме хронических отитов. Исходя из этого, дальнейшие исследования были сосредоточены на изучении клинических и эпизоотологических особенностей Malassezia-отитов у собак. Также по результатам исследований можно заключить, что роль М. pachydermatis в этиологии кожных поражений (дерматитов) у собак и отитов у кошек хотя и не является ведущей, однако должна приниматься во внимание при рутинных диагностических исследованиях.

2.2.2.2.

При изучении клинических особенностей Malassezia-отитов у собак учитывали локализацию патологического процесса (односторонний или двухсторонний), клинические изменения ушной раковины и слухового канала,

Односторонняя

с переходом в Односторонняя

поведенческие реакции больных животных, длительность заболевания. Данные по локализации Malassezia-отитов представлены на рис.12.

Рис. 12. Локализация Malassezia-отитов у собак

В большинстве случаев (63,5%) у животных было поражено оба уха (двухсторонние отиты). Односторонняя локализация наблюдалась в 22,6% случаев, а в 13,9% при односторонних отитах при дальнейших клинических наблюдениях отмечали распространение патологического процесса на второе ухо. Таким образом, преобладающей являлась билатеральная форма Malassezia-отитов.

Среди клинических признаков заболевания наиболее важным являлся характер ушного экссудата, на основании которого было диагностировано несколько форм Malassezia-отитов у собак, а именно:

гнойная форма, характеризовавшаяся выделением гнойного смета- нообразного экссудата (см. рис. 14);

церуминозная форма, при которой образовывался обильный ушной секрет различного цвета и консистенции (рис. 15);

себорейная форма, характеризовавшаяся образованием множественных сухих бляшек и корочек на медиальной стороне пораженной ушной раковины (рис. 16).

Частота встречаемости различных форм клинических форм Malassezia- отитов представлена на рис. 13.

Себорейная

Церуминозная форма 85.2%

Рис. 13. Частота встречаемости различных клинических форм Malassezia-отитов у собак

Рис. 14. Гнойная форма Malassezia-OTHTa у собаки (гиперемия, гнойный сметанообразный экссудат)

Рис. 16. Себорейная форма Malassezia-OTHTa у собаки (множественные сухие бляшки и корочки на медиальной стороне ушной раковины)

Среди обследованных животных превалировала церуминозная форма Malassezia-отитов (85,2%), гнойная и себорейная формы наблюдались значительно реже (6,1 и 8,7% соответственно).

Рис. 15. Церуминозная форма Malassezia-OTHTa у собаки (гиперемия, обильные пастообразные желто-коричневые выделения)

Помимо характера экссудата, отмечали следующие клинические проявления Malassezia-отитов: наличие гиперемии, стеноз ушного канала, мацерация, гипрекератоз, лихенизация, зуд, расчесы, неприятный запах, болезненность при пальпации. Частота встречаемости этих признаков представлена на рис. 17.

Рис. 17. Частота встречаемости различных клинических признаков при Malassezia-OTHTax у собак

Наиболее типичная клиническая картина Malassezia-OTHTa характеризовалась гиперемией, как правило сопровождалась зудом, болезненностью. В силу зуда часто наблюдали самотравмирование животных - расчесы в области ушных раковин, а в отдельных случаях - образование гематом. Также наблюдали гиперкератоз, лихенизацию кожи ушных раковин и устья слухового канала - признаки, характерные для хронических воспалительных процессов. Почти всегда поражения сопровождались специфическим неприятным запахом.

Оценка длительности заболевания при Malassezia-отитэх собак представлена на рис. 18.

Рис. 18. Длительность заболевания при Malassezia-oTHTax у собак

Во всех зарегистрированных случаях Malassezia-отиты носили хронический характер, длительность заболевания составляла не менее 1 месяца и могла достигать 3 и более лет. В большинстве случаев (75%) владельцы животных обращались за ветеринарной помощью, когда клинические признаки отита наблюдались уже в течение 1-3 лет. Самый длительный срок заболевания, зарегистрированный в данном исследовании - 5 лет и 3 месяца. Как правило, заболевание носило персистирующий характер, с периодическими улучшениями и обострениями.

Проведенные исследования позволили систематизировать клинические формы Malassezia-отитов у собак, выявить наиболее значимые клинические предикторы.

2.2.2.3. Изучение эпизоотологических особенностей Malassezia-отитов у собак Изучение эпизоотологических особенностей Malassezia-отитов у собак проводили на основе анализа анамнестических данных 115 животных с под-

твержденным диагнозом «Malassezia-отит». Учитывали встречаемость заболевания в зависимости от пола, возраста, породы животных и времени года.

Анализ встречаемости Malassezia-отитов у собак в зависимости от пола представлен на рис. 19.

||11|1||1||Ш|||||||ТШ

самки 60.9%

Рис. 19. Встречаемость Malassezia-отитов у собак в зависимости от пола

Частота встречаемости Malassezia-отитов у самок была на 21,8% выше, нежели у самцов.

Анализ встречаемости Malassezia-отктов у собак разных возрастных категорий представлен на рис. 20.

3-6 мес. 6-12 мес 1-3 года 3-6 лет старше 6 лет

Возрастные группы животных

Рис. 20. Встречаемость Malassezia-отитов у собак в зависимости от возраста.

Данные демонстрируют, что Malassezia-отиты могут регистрироваться у собак практически любого возраста, хотя наиболее подвержены заболеванию животные в возрасте 3-6 (27,8%) и более лет (40,0%).

Собаки, включенные в исследование, принадлежали к 14 различным породам. Анализ частоты встречаемости Malassezia-отитов у собак в зависимости от породы представлен на рис. 21.

пекинесс

Рис. 21. Частота встречаемость Malassezia-отитов у собак различных пород

Malassezia-отиты диагностировались у собак самых различных пород, как популярных и широко распространенных, так и экзотических. Среди пород с диагнозом Malassezia-отит большинство относилось к брахицефалам — породам с укороченной мордой - шарпей (13,7%), чау-чау (10,5%), английский и французский бульдоги (7,3 и 5,5%), а также к породам с длинными висячими ушными раковинами - кокер-спаниель (8,0%), бассет-хаунд (18,5%).

Сезонность заболевания определяли, исходя из времени обращения владельцев животных за ветеринарной помощью (рис. 22).

декабрь- март-май июнь- сентябрь- февраль август ноябрь

Рис. 22. Встречаемость Malassezia-отитов у собак в зависимости от времени года

Отмечено, что частота выявления Malassezia-отитов была выше в весенний (28,7%) и осенний (39,1%) периоды, нежели в зимний и летний, что может быть связано с обострениями хронических инфекционных процессов.

2.2.2.4. Изучение факторов, предрасполагающих к возникновению Malassezia-отитов у собак

Анализ условий ухода, содержания и кормления животных, ассоциированных с заболеванием Malassezia-отитами, представлен на рис. 23.

v ^ 4 о о

XX

\\4\W >nxn

Рис. 23. Условия содержания, кормления и ухода за животными, ассоциированные с заболеваемостью Malassezia-отитами.

Учитывая, что Malassezia-инфекции относятся к оппортунистическим заболеваниям, большое практическое значение имеет выяснение тех прямых и косвенных факторов, на фоне которых развивается данная патология. В связи с этим на основе анамнестических и клинических данных был проведен анализ встречаемости Malassezia-инфекций животных в зависимости от условий кормления и содержания, наличия инфекционных и незаразных заболеваний, применения лекарственных препаратов.

Большинство больных животных содержалось в квартирных условиях (94%), имело в рационе готовые (сухие и консервированные) корма (81%), как правило не обеспечивалось достаточным моционом (91%), что ведет к малоподвижному образу жизни, гиподинамии. Часто больные животные подвергались воздействию различных стрессовых факторов (76%), а 73% животных получали избыточное кормление.

Исходя из данных историй болезни животных и клинических наблюдений, было проанализировано, с какими инфекционными и незаразными патологиями наиболее часто ассоциированы Malassezia-инфекции. Результаты представлены на рисунке 24. \

70- 60-

Рис. 24. Сопутствующие заболевания у собак, ассоциированные с Ma lassezia-OTHTa in и

Рис. 25. Тканевая форма М. pachydermatis в препарате из патологического материала. (Увеличение х400)

Как демонстрирует данная микрофотография, М. pachydermatis присутствует в очаге поражения в форме овальных дрожжевых клеток с толстой оболочкой, напоминающих по форме «отпечаток стопы» или «земляной орех». Клетки в основном почкующиеся, почкование монополярное, перкур- рентное. Клетки располагаются одиночно или в скоплениях. Псевдомицелий не обнаружен.

Выделенные нами эпизоотические штаммы М. pachydermatis проявляли схожие морфологические свойства. Описание морфологических свойств колоний М. pachydermatis (1-я генерация) проводили при посеве штрихом на чашки Петри, на 7-е сутки роста при 36°С. Морфологические свойства М. pachydermatis на различных питательных средах (среда Барфатини, среда Сабуро, сусло-агар, сусло-агар с хлорамфениколом, среда Чапека) представлены на рисунках 26-29.

Рис. 26. Морфология колоний М. pachydermatis на сусло-агаре, 7 сут. роста

Рис. 27. Морфология колоний М. pachydermatis на сусло-агаре с добавлением хлорамфеникола, 7 сут. роста

*«.

** ' |

ЖОЧк 0 41»

Рис. 28. Морфология колоний M. pachydermatis на среде Барфатини, 7 сут. роста

Рис. 29. Морфология колоний М. pachydermatis на среде Сабуро, 7 сут. роста

На среде Барфатини М. pachydermatis образует ассиметричные колонии, светло-желтые или светло-кремовые, плоские или слегка выпуклые, морщинистые, матовые. Края слабо-фестончатые. Вокруг колоний заметна зона помутнения среды шириной 2-3 мм. Реверс желтый. Диаметр 3-5 мм

На среде Сабуро наблюдали колонии округлой формы, от светло- кремового до светло-коричневого цвета, выпуклые, гладкие, матовые. Края ровные. Реверс бесцветный, диаметр 3-5 мм.

На сусло-агаре колонии округлой формы, от светло-кремового до свет- ло-коричневого цвета, выпуклые, гладкие, матовые. Края ровные. Реверс бесцветный, диаметр 2-4 мм.

На сусло-агаре с добавлением хлорамфеникола колонии округлой формы, от светло-кремового до светло-коричневого цвета, выпуклые, гладкие, матовые. Края ровные. Реверс бесцветный, диаметр 2-Змм. На среде Чапека рост М. pachydermatis не обнаружен.

Характерной отмеченной нами морфологической особенностью М. pachydermatis на среде Барфатини являлось образование зоны помутнения среды вокруг колоний, заметной на темном фоне, ширина которой составляла 2-4 мм (рисунок 30).

Рис. 30. Образование зон преципитации вокруг колоний М. pachydermatis на среде Барфатини Данный феномен наблюдался только на липид-содержащей среде Барфатини. В литературе он рассматривается, как зона образования преципитата [92], и обусловлен липолитической активностью грибов рода Malassezia. Таким образом, образование зоны преципитации на среде Барфатини указывает на липофильность данного микроорганизма и может использоваться, как дополнительный дифференциальный признак.

Морфологические свойства М. pachydermatis на средах Сабуро, сусло- агаре и сусло-агаре с хлорамфениколом были схожи между собой, однако энергия роста гриба на среде с антибиотиком была несколько ниже. С целью детального изучения морфологических свойств штаммов М. pachydermatis культивирование посевов было продолжено до 14 сут. Их морфологическая картина представлена на рисунках 31-33.

Выращивание М. pachydermatis в течение 14 сут. позволило выявить более четкие морфологические особенности этого вида на различных средах. На среде Барфатини наблюдали образование округлых или слега ассимет- ричных колоний, кремово-желтого или светло-коричневого цвета, центральная часть выпуклая в виде пуговчатого или кратеровидного возвышения, периферия плоская. Поверхность колоний кожистая, шероховатая, матовая. Края неровные, фестончатые. Цвет реверса светло-коричневый. Диаметр колоний 8-12 мм. Вокруг колоний отмечена зона преципитации 4-7 мм.

На агаре Сабуро наблюдали округлые бежевые, слега желтоватые колонии, центральная часть несколько темнее периферической. Колонии выпуклые, с выраженным заостренным возвышением, что придает колониям конусовидное очертание. Поверхность кожистая, гладкая, матовая. Края ровные. Реверс темно-желтого цвета. Диаметр колоний 6-9 мм.

На сусло-агаре М. pachydermatis образовывал округлые колонии, кремового или светло-коричневого цвета, выпуклые, с плавным слабозаметным возвышением в центре. Поверхность кожистая, слегка шероховатая, матовая. Края ровные. Реверс светло-коричневого цвета. Диаметр колоний 8-10 мм.

Рис. 32. «Гигантские» колонии М. pachydermatis на среде Сабуро (14 сут. роста)

Рис. 33. «Гигантские» колонии М. pachydermatis на сусло-агаре (14 сут. роста)

Таким образом, длительное культивирование (до 14 сут) позволило более детально охарактеризовать морфологические особенности М. pachydermatis на различных питательных средах, которые не удается обнаружить при краткосрочном культивировании (7 сут).

Хотя представленные выше результаты получены при посеве штрихом образцов патматериала, отобранных с помощью тампона-зонда, в ряде случаев рост М. pachydermatis обнаруживали в процессе рутинных исследований при посеве волос и чешуек, отобранных из кожных поражений (посев микологическим крючком на пробирки). Морфология колоний М. pachydermatis при таком методе посева отображена на рисунке 34.

Колонии округлые, слегка ассиметричные, выпуклые, кремовые или желтоватые, поверхность гладкая, матовая, края ровные. Диаметр 4-6 мм (сусло-агар, 7 сут. роста).

Рис. 34. Колонии М. pachydermatis в посевах патматериала из кожных поражений (волосы, чешуйки) (сусло-агар, 7 сут. роста)

В результате проведенных исследований были охарактеризованы морфологические свойства М. pachydermatis и их вариабельность в зависимости от метода посева, питательной среды и сроков культивирования.