Методы получения чистых культур и культивированияпочвенных микроорганизмов

Чистой культурой микроорганизма называют культуру, представляющую собой потомство одной клетки. В случае нитчатых или мице- лиальных организмов чистая культура может быть получена из одной многоклеточной нити.

Посевом почвенной суспензии на поверхность плотных сред в чашках Петри получают изолированные колонии микроорганизмов. Для выделения чистой культуры материал, взятый петлей из отдельной колонии, переносят на свежую питательную среду и равномерно распределяют шпателем по поверхности. После этого тем же шпателем, не обжигая его, засевают последовательно еще 2—3 чашки. Обычно на первой чашке после определенного срока инкубации наблюдается густой, а иногда и сплошной рост микроорганизмов, а на последующих образуются отдельные колонии. Путем пересева из этих колоний получают чистые культуры. Чистоту выделенной культуры проверяют следующим методом: культуру рассеивают на поверхность плотной среды и следят за характером и однородностью роста колоний; контролируют микроскопически.

Культивирование микроорганизмов требует определенных условий температуры, аэрации, pH среды. Постоянная температура поддерживается в термостатах. Термостатами могут быть специальные шкафы, существуют и специальные термостатные комнаты. Мезофильные организмы выращивают при температурах 25—35°, термофильные — 50— 60°, психрофилы — 0—20°. Водоросли и фотосинтезирующие бактерии инкубируют в термостатах с искусственным освещением — люмино- статах.

Аэробные микроорганизмы культивируют на поверхности плотных и жидких питательных сред в чашках Петри, колбах и матрасах или в глубине жидких сред, снабжая последние необходимым для микробов количеством кислорода. Обогащение кислородом может осуществляться встряхиванием или перемешиванием культур на качалках, пропусканием струи стерильного воздуха через толщу среды.

Для получения больших количеств биомассы микроорганизмов или культуральной жидкости используют специальные аппараты — ферментеры, оборудованные для перемешивания среды, подачи и распыления воздуха, а также имеющие контрольно-измерительные приборы, регистрирующие температуру, давление, скорость тока воздуха, pH среды и тому подобное.

При культивировании анаэробов из среды и окружающего пространства удаляют кислород. Для этого кипятят среду перед использованием, заливают слоем масла или вазелина после засева. Плотную питательную среду заливают слоем агара. Другой способ — выращивание культур анаэробных микроорганизмов в анаэростатах, где создается либо вакуум с остаточным давлением 1—10 мм рт. ст., либо атмосфера из инертного газа. Для культивирования некоторых анаэробов к средам добавляют редуцирующие вещества — тиогликолят натрия, редуцирующие сахара, восстановленное железо.