ПАРВОВИРУСНАЯ ИНФЕКЦИЯ СВИНЕЙ

Связь парвовируса свиней с нарушением воспроизводительной функции свиноматок в естественных условиях впервые была установлена в 1967 г. в Великобритании, однако экспериментально болезнь была воспроизведена только через 10 лет. Необходимо учитывать, что в патологии воспроизводительной системы свиноматок существенное значение имеют вирусы чумы свиней, болезни Ауески, японского энцефалита, энтеровирусы, ротавирусы и парвовирусы. Причём последние причиняют наибольший экономический ущерб, который проявляется, в основном, за счёт гибели и мумификации эмбрионов. При возникновении болезни в ранее благополучных хозяйствах рождение живых поросят на одну свиноматку в год снижается на 50-60%, в стационарно-неблагополучных хозяйствах - иа 10-20%.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Парвовирус свиней - наиболее частый возбудитель болезни, известный как СМЕДИ (мёртворождаемость, мумификация, смерть эмбриона, бесплодие). До недавнего времени считалось, что возбудителем СМЕДИ являются только энтеровирусы пяти типов. В настоящее время доказано, что в этиологии синдрома СМЕДИ участвует парвовирус одного серотипа. Парвовирусная и энтеровирусная инфекции клинически проявляются одинаково.

Болезнь у свиноматок протекает, как правило, без видимых симптомов. Наблюдается лишь нарушение репродуктивной функции. В первую неделю после заражения отмечают лёгкую лейкопению и иногда кратковременное повышение температуры. В этот период вирус может быть выделен из крови и тканей с резко выраженной пролиферативной активностью. В период виремии вирус проходит через плаценту и инфицирует эмбрионы или плоды.

В оплодотворённые яйцеклетки и ранние эмбрионы, содержащие “прозрачную” оболочку, вирус не проникает. Ранние эмбрионы, вероятно, инфицируются после удаления “прозрачной” оболочки и имплантации в слизистую оболочку матки (через 9-12 дн после оплодотворения). Заражение всех эмбрионов в этот период приводит к их гибели и полному рассасыванию с последующим возвратом свиноматок в охоту. При заражении и гибели части эмбрионов беременность протекает нормально, но уменьшается число поросят в помёте. Полное рассасывание эмбрионов происходит в том случае, если они погибли в первые 30-36 дн беременности, т. е. в эмбриональную фазу развития. После этого срока начинается плодная фаза развития, характеризующаяся кальцификацией скелета и невозможностью полного рассасывания плода. Заражение и гибель всех плодов в этот период приводит к их мумификации и отсутствию родов. Введение такой свиноматке после предполагаемой даты опороса простаглантидов обьино приводит к опоросу. Передача вируса от одного плода к другому происходит медленно, в связи с этим они погибают на различных стадиях развития. Обычно не все плоды поражаются вирусом, и при опоросе рождаются мумифицированные плоды различной величины, мёртвые, слабые и нормальные поросята. Заражение 75-дн плодов не даёт результатов. Материнские АТ защищают молодых свинок в течение 6 мес. У несупоросных свиней вирус не вызывает симптомов болезни. Инфицированные свиньи экскрети- руют вирус с калом 3-7, иногда 14 дн (7, 9,10,11,21,50,57).

Свиньи, инфицированные в постнатальный период практически не проявляют клинических признаков заболевания, хотя в течение 7-14 дн выделяют вирус с мочой, фекалиями и слюной, после чего сохраняют иммунитет пожизненно. Трансплацентарная передача вируса плодам и эмбрионам происходит во время виремии у неиммунных свиноматок после первичного инфицирования.

У хряков-производителей болезнь протекает бессимптомно, но они выделяют вирус со спермой в течение 2-3 нед после заражения. Вирус не оказывает непосредственного действия на сперматозоиды. Однако парвовирусная инфекция в гениталиях у хряков является одной из причин мумификации плодов и мёртворождений у свиноматок. У иммунных свиноматок беременность, как правило, проходит нормально. В последнее время парвовирус свиней выделен из содержимого тонкого кишечника поросят 2-3-нед возраста с дияряйиьтм синдромом и везикулярными поражениями. У поросят терялся аппетит, повышалась температура тела, появлялись понос и рвота. У небеременных свиноматок макро- и микроскопических изменений в тканях и органах не обнаружено. Макроскопические изменения отсутствовали у супоросных свиноматок, заражённых в различные сроки беременности, однако микроскопически у них обнаружены фокальные скопления мононуклеарных клеток в эндо- и миометрии и периваскулярные муфты из лимфоидных и плазматических клеток в головном и спинном мозге.

Макроскопически у плодов, инфицированных до периода иммунокомпетентности, обнаруживают различные уровни задержки роста, рельефность кровеносных сосудов в результате переполнения кровью, отёк, геморрагии, скопление серозно-кровянистой жидкости в полостях и дегидратацию (мумификацию). Многие из этих изменений встречаются в плаценте, микроскопически отмечают обширные зоны некроза во многих тканях и органах и внутриклеточные включения. У плодов, заражённых после наступления иммунокомпетентности, обнаруживают только микроскопические изменения (инфильтрацию мононуклеарными клетками), свидетельствующие об иммунном ответе на введение вируса.

Патогенез. Заболевание свиноматок протекает бессимптомно, вирус проникает через плаценту, поражает плоды, вызывая их мумификацию и гибель. Воздействие на функцию яичников проявляется в появлении абортов и преждевременных родов.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирус впервые выделили из плода обортировавшей свиноматки Мауег и др. в 1966 г. в хозяйстве, где было отмечено нарушение репродукции свиней (преждевременные роды, аборты, мумификация плодов).

Морфология и химический состав. Зрелый вирион имеет кубическую симметрию, включает 32 капсомера, 2 или 3 капсидных белка, диаметр вириона около 20 нм, не содержит оболочки и липиды, мол.м. составляет 5,3-106 Д. Вирусный геном представлен 1- нитевой ДНК с мол.м. 1,4 кД, т.е. около 26,5% массы полного вириона. Плавучая плотность в CsCl полного инфекционного вируса, неполного (“пустого”) вириона и экстрагированной вирионной ДНК составляет 1,38-1,395, 1,30-1,315 и 1,724 г/см3 соответственно (11,13,41).

Устойчивость. Парвовирус свиней (ПС) устойчив к действию различных физикохимических факторов. Сохраняет инфекционность при pH 3-9 и 37°С 1,5 ч. однако полностью инактивируется при pH 2 в тех же условиях. Инфекционность его не снижается при pH 2,8 и 4°С в течение 18 ч. Вирус стабилен при 56°С в течение 2 Сут, прн 70°С - 2 ч и при 80°С инактивируется за 5 мин. Не теряет инфекционность в культуральной жидкости с 20% фетальной сыворотки коров при 35-37°С в течение 15 нед. Устойчив при обработке хлороформом, эфиром и фреоном в 10-50%-ной концентрации в течение 10-30 мин при комнатной температуре, дезоксихолатом натрия (0,01-0,1%-ным) -1ч при 37°С, этанолом (10- 40%-ным) - 0,5-2 ч при 4-20°С (16,17).

Вирус резистентен к действию РНК- и ДНК-азы и протеаз (папаина, химотрипсина, трипсина, пепсина), что позволяет использовать эти ферменты для удаления клеточных нуклеиновых кислот и белков при очистке вируса.

АГ структура. Вирус содержит 3 больших полипептида: А, В, С.

АГ вариабельность и родство. Все сравнивавшиеся изоляты ПС оказались в АГ- отношении похожими, если не полностью идентичными (48). ПС АГ связаны также с некоторыми членами рода (19, 37,38). Однако, их идентичность может быть установлена наиболее специфичными серологическими реакциями, такими как PH и РТГ А (40).

Локализация вируса. Наибольшее количество вируса обнаруживается в лимфоидных тканях. Ко времени гибели плода вирусный АГ накапливается в цитоплазме большинства ? клеток эмбриона и в плаценте. У всех экспериментально заражённых ие иммунизированных поросят развивается виремия, и они выделяют вирус со слюной и фекалиями. Выжившие поросята из инфицированного помёта могут оставаться всю жизнь вирусоносителями и периодически выделять его во внешнюю среду.

АГ активность. Вирус обладает выраженной АГ активностью и индуцирует синтез ВНА, КСА, ПА и анти-ГА. Изучение АГ свойств изолированных индивидуальных вирион- ных полипептидов возбудителя показало, что антисыворотка к каждому структурному белку нейтрализует инфекционную активность полных вирионов и взаимодействует со всеми 3-мя структурными белками вируса. Каждый индивидуальный белок вируса взаимодействует с ВНА, полученными на введение полного вируса. Предполагают, что вирусспецифические АГ детерминанты имеются на всех вирионных белках ПВСв. Получение монАТ к каждому белку позволит выяснить количество АГ детерминант и их распределение. Биологический полураспад АТ к ПВСв у поросят зависит от их массы, в среднем он составляет от 18 до 20 дн. Для обнаружения и количественного определения гуморальных АТ чаще применяют РТГА. Перед постановкой реакции сыворотки инактивируют 30 мин при 56°С, затем обрабатывают эритроцитами и каолином. PH для обнаружения и количественного определения гуморальных АТ к ПС используют реже, так как вирус вызывает недостаточно чёткий ЦПЭ, однако PH более чувствительна, чем РТГА. Разработан микрометод постановки PH.

Экспериментальная инфекция. ПВСв оказался патогенным для этого вида животных и апатогенным дня хомячков и мышей. У всех заражённых поросят симптомы болезни и патоморфологические изменения обычно отсутствуют, однако обнаруживаются специфические АТ. Вирус выделяют из семенных пузырьков на 7-9-й день после заражения. С 12-го дня у животных выявляют анти-ГА. Вирулентный шт. 90НБ вызывал у поросят виремию через день после заражения, продолжавшуюся до убоя (через 2, 4, 6 дн после заражения). Вирус выделяли в титрах от 2 до 6 ^ ТЦД 50/мл из крови, мозга, легких, печени, селезенки, поджелудочной железы, тонкого кишечника, лимфоузлов всех инфицированных поросят. Титр его в крови после перорального и подкожного заражения был 101,75-102’25 и 104,25-106’2 ТЦД50/МЛ соответственно. Анти-ГА были обнаружены на 6-й день после заражения (31).

У поросят, находившихся в контакте с заражёнными животными, так же обнаруживались специфические АТ, что свидетельствует о контагнозности инфекции. После внутримоз- гового, орального и интраназального заражения поросят каких-либо определённых и воспроизводимых клинических симптомов не наблюдалось. Однако у таких животных удавалось выделить вирус из испражнений, крови и большинства тканей. К 7-му дню выявляли специфические АТ. При заражении свиней парвовнрусом на разных стадиях беременности наблюдали трансплацентарное инфицирование поросят.

Культивирование. ПВСв хорошо размножается в первичных культурах клеток почек, щитовидной железы и тестикул поросят и накапливается в тигре 107-108 ТЦД 50/мл. К вирусу чувствительны некоторые перевиваемые культуры клеток свиней. В перевиваемых культурах клеток почек (РК-15) и тестикул (БТ) поросят он накапливается в титре 106-107 ТЦДш/мл. Перевиваемая культура клеток СПЭВ нечувствительна к вирусу.

Репликация ПВСв лучше всего происходит в культурах клеток свиного происхождения, а именно в первичных клетках и МРК (почки мини свиньи) и ЕБК (клетки эмбриональной почки свиньи). Он хорошо культивируется в чувствительных культурах клеток. Особенностью культивирования и накопления ПС является его зависимость от клеточного деления. Кривая размножения вируса зависит от количества митозов. Он хорошо размножается в делящихся клетках почки плода свиньи при заражении через 24 ч после посадки культуры. Наивысщая концентрация вируса достигается на 3-4-й дн культивирования. ЦПЭ характеризуется вакуолизацией и округлением клеток, диффузной грануляцией. При изучении цикла размножения методом ИФ было установлено, что АГ обнаруживается в ядре клеток через 6

ч после заражения и накапливается в максимальных количествах к 18-24 ч.

Перевиваемые культуры клеток человека (HeLa, Нер-2, KB, FL-Amnion) оказались кон- таминированными ПВСв. Вероятно, в эти культуры клеток он был занесён с трипсином, полученным из поджелудочной железы инфицированных свиней. Выделение ПВСв из коммерческой партии трипсина подтверждает эту гипотезу и свидетельствует о высокой устойчивости вируса к действию различных факторов в процессе изготовления препарата. Конта- минированные культуры клеток можно освободить от вируса путём серийного пассирования в присутствии специфической антисыворотки (1%) в ростовой среде. ПВСв интенсивно размножается в делящихся клетках, в связи с этим заражение проводят в период пересева культуры клеток или в период её логарифмического роста (30-50% монослоя), когда большинство клеток находится в S-фазе клеточного цикла, т.е. в фазе синтеза ДНК, когда в клетках имеются ДНК-полимеразы, необходимые для репликации вируса.

Размножение ПВСв в первичных и перевиваемых культурах клеток сопровождается развитием ЦПЭ, который характеризуется диффузной зернистостью и округлением клеток, отделением их от стекла и частичным или полным разрушением монослоя. Полный ЦПЭ наблюдается в том случае, если делящиеся клетки были инфицированы вирусом с высокой множественностью заражения. При низкой множественности заражения он не развивается и для обнаружения вируса необходимо субкультивирование инфицированных клеток. В заражённых клетках через 18-24 ч после инокуляции развиваются внутриядерные тельца- включения типа А, которые состоят из вирусного АГ (1). Шт 90/HS/1 ПС образует бляшки в культе клеток ESK. Включение в покрытие ДЭАЭ декстрана в концентрациях 50-200 мкг/мл способствует увеличению размера бляшек, ио не влияет иа инфекционные титры. Одним из характерных свойств ПВСв является способность вызывать латентную инфекцию клеточных культур (23). ПВСв был обнаружен как контаминант первичных и перевиваемых клеточных культур. Пути загрязнения культур ПВСв могут быть различными, включая использование контаминированного трипсина. Перед использованием культуры рекомендуют исследовать её с целью исключения парвовирусной контаминации. Предложен метод определения иифекциоиности вируса в тканевой культуре с использованием панелей для микро- титрования, в которых конечное разведение определяется по РГА и ГАд эритроцитов морской свинки. Разработана методика титрования инфекционности ПВСв методом бляшек под агаровым покрытием в культуре перевиваемой линии клеток ST тестикулов поросёнка.

ГА свойства. ПВСв агглютинирует эритроциты морской свинки, цыплёнка, кошки, крысы, мыши, обезьяны, человека и не агглютинирует эритроциты барана, лошади, свиньи, КРС, собаки, кролика, хомячка и утки. Для определения его гемагглютинирующей активности чаще используют эритроциты морской свинки, реакцию проводят при температуре 4°С, а в качестве разбавителя применяют фосфатно-буферный р-р (pH 7,2). Наибольшим титр Г А наблюдается при использовании вероналового буфера. Титры Г А ПВСв могут значительно варьировать в зависимости от донора эритроцитов. Вирус не освобождается с эритроцитов при 37-40°С в течение 1 ч, однако в щелочном буфере (pH 9) он полностью элюирует с них за 30 мин при комнатной температуре.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Источник возбудителя инфекции - больные и переболевшие свиноматки, которые выделяют вирус с фекалиями, мочой, носовыми и вагинальными секретами, плацентой, абортированными и мёртворождёнными плодами. Здоровые животные заражаются пероральным и аэрогенным путями, а также при случке и искусственном осеменении инфицированной спермой. Вирус выделяется с фекалиями до 2 нед после заражения свиней per os и в помещениях сохраняет инфекционность до 135-140 дн. Обнаружение его в вагинальной слизи свиноматок с нарушением воспроизводительной функции и семени хряков-производителей свидетельствует о важности полового пути в передаче вируса. Установлено, что ПВСв выделяется через половой тракт экспериментально зараженных хряков (20,22,26).

В благополучные хозяйства ПВСв заносится, главным образом, с ремонтными свинками и хряками, которые являются вирусоносителями, и инфицированной спермой. Трансплацентарное заражение плодов может привести к развитию иммунотолерантности, такие животные периодически выделяют вирус до 8-мес возраста Поскольку вирус длительно сохраняет активность во внешней среде, не исключена возможность его механического заноса Занесённый в благополучное хозяйство, он в течение 2-3 мес поражает всех животных.

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях болеют только свиноматки. У них вирус проходит через плаценту и в зависимости от срока супоросности приводит к различной патологии. У зараженных на ранней стадии супоросности (до 36 дн) эмбрионы погибают и рассасываются. Такие свиноматки, как правило, вновь приходят в охоту, и последующая супоросность протекает нормально. У зараженных на 35- 56-й дн супоросности часть или реже все плоды погибают и мумифицируются, что приводит к уменьшению числа жизнеспособных поросят. Мертворожденне, в основном, происходит при инфицировании свиноматок на 56-70 день супоросности. После этого срока плоды в большинстве случаев становятся устойчивыми к летальному действию вируса, но после рождения могут оставаться вирусоносителями, отставать в росте.