ИНФЕКЦИОННЫЙ БРОНХИТ ПТИЦ

Infectiose Bronchitis des Huhnes, Austeokende tracheobronchitis der Kuken (нем.);

Bronchite infectieuse (франц.)

Инфекционный бронхит (ИБ) - болезнь, поражающая кур.

Симптомы и патологоанатомические изменения. Отмечают три клинических синдрома: респираторный, нефрозно-нефритный и репродуктивный.

Респираторный синдром проявляется у молодняка и характеризуется кашлем, трахеальными хрипами, носовыми истечениями, затрудненным дыханием (с открытым клювом), иногда конъюнктивитом, ринитом и синуситом. Высокая летальность наблюдается, главным образом, среди цыплят до 1-мес возраста, у 2-3-мес молодняка она может достигать 90 %, но чаще бывает в пределах 10-35 %. У цыплят 30-60-дн возраста болезнь протекает, как правило, хронически и в ассоциации с колибактериозом и микоплазмозом. При патологоанатомическом вскрытии обнаруживают серозный, катаральный или казеозный экссудат в трахее или бронхах.

Нефрозно-нефритный синдром. Некоторые штаммы вируса обладают нефротропно- стью и могут в течение первых 2-х нед поражать почки и мочеточники с отложением уратов. Течение болезни - острое. У больных птиц отмечают депрессию и диарею с примесью уратов. При первичной циркуляции вируса в хозяйстве летальность птицы достигает 50-70%. При патологоанатомическом вскрытии обнаруживают набухание почек и пестроту рисунка. Микроскопические изменения варьируют от нефрита до некротического нефроза (Рис. 136).

Поражение репродуктивных органов (репродуктивный синдром) регистрируется обычно у кур старше 6 мес. Заболевание протекает бессимптомно или с незначительным поражением органов дыхания.

В крупных птицехозяйствах ИБ имеет стационарный характер и протекает как хроническая инфекция без ярко выраженных симптомов поражения респираторных органов; цыплят более уязвимом возрасте (1-30 дн) в значительной степени защищает пассивный иммунитет. Поражение репродуктивного тракта у цыплят и кур неизбежно приводит к снижению яйценоскости. Только вирусологические исследования и анализ экономических показателей выращивания цыплят и продуктивности кур дают возможность диагностировать ИБ, протекающий хронически или в ассоциации с другими болезнями.

Острое течение ИБ характеризуется контагиозностью, массовой заболеваемостью, значительным снижением продуктивности, проявлением респираторных признаков болезни и появлением деформированных мелких яиц (2).

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Впервые вирус выделили Бич и Шалк в США в 1936 г. ВИБ - первый, описанный в литературе коронавирус птиц и первый коронавирус, в геноме которого полностью определена последовательность нуклеотидов. Сравнение нуклеотидной последовательности генов нуклеокапсида 3-х штаммов ВИБ (Grey, Arcansas 99 и Holland 52) свидетельствует об их высокой консервативности (гомология 91,1 - 96,5).

Морфология и химический состав. Анализ последовательностей гена S1 австралийских штаммов ВИБ позволил идентифицировать две генотипически различных группы. Шт. VicS, V5/90, N1/62, N3/62, N9/74, и N2/75 относятся к группе 1. Все штаммы группы 1 способны размножаться в трахее и почках, но только 4 из них (VicS, N1/62, N9/74, и N2/75) являются нефропатогенными с летальностью 32-96%.

Устойчивость. В трупах павшей птицы вирус быстро теряет инфекционную активность; в питьевой воде при комнатной температуре он сохраняется 11 ч; в пораженных тканях, в 50%-ном р-ре глицерина при температуре 4°С - до 80 дн; в аллантоисной жидкости при температуре 37°С - 3 дн, при 20-30°С - 24, при 4°С - 427, при -25°С - 537 дн. В инфицированной аллантоисной жидкости при температуре -30°С вирус активен 17 лет.

Большинство штаммов ВИБ кур инактивируется при 56°С за 10 мин, однако среди них встречаются варианты, различающиеся по терморезистентности.

Все штаммы ВИБ относительно резистентны к кислой среде (рНЗ,0) и чувствительны к щелочной среде (рН11). Все они также чувствительны к хлороформу и дезоксихолату натрия. Некоторые из них (Ве-42 и Connauqht) после обработки эфиром обладают остаточной инфекционностью. По чувствительности к эфиру и прогреванию при 45°С в течение 90 мин все штаммы ВИБ разделены на 3 группы: - первая группа включает Ве-42 и Connauqht - штаммы, чувствительные к 2-м обработкам; - вторая группа включает 6 штаммов, которые относительно резистентны к эфиру, но чувствительны к прогреванию при 45°С в течение 90 мин; в 3-ю группу входят шт. В-41 и КН, которые резистентны к эфиру и прогреванию. При лиофилизации все штаммы резистентны к трипсину, очень чуствительны к УФ- облучению. Глюкоза (10%-ный р-р) стабилизирует вирус. Под действием УФ-лучей ВИБ разрушается через 18-24 ч.

Антигенная структура. ВИБ имеет 2 гликопротеина: поверхностный S и мембранный М. Белок SP этого вируса состоит из 2-х гликопротеидов SP1 и SP2, образующихся в результате посттрансляционной модификации (21). Пепломерный белок путем прогеолиза был разделен на 2 части: N-терминал S1 и С-терминал S2 гликопептида (26). Белки ВИБ различаются по тканевому тропизму. Изменение патогенности штаммов вируса связано с изменением изоэлектрических точек их белков, поэтому классификация белков на основе изоэлек- трических точек позволяет вдентифицировать высокопатогенные и персистентные штаммы (35). У 4-х английских штаммов, принадлежащих к 3-м разным серотипам ИБ, S1 белки различаются по аминокислотному составу только на 2-3 %. Их аминокислотные последовательности были также очень близки аминокислотным последовательностям S1-белков 3-х голландских изолятов (D207, D274 и D3896). С использованием 16 монАТ были обнаружены общие эпитопы ВНА у всех 8 изолятов, хотя поликлональные сыворотки дифференцировали их только на 3 серотипа. Эпитопы ВНА локализованы на первой и третьей четвертях S1 - белка. Авторы полагают, что серологические, эпизоотологические исследования ИБ должны быть дополнены анализом данных по секвенированию нуклеиновой кислоты и по взаимодействию с монАТ (14). Белки S, М и N ВИБ имеют мол.м. 84-87, 90-91 и 27-30 кД соответственно. Различают несколько европейских (>4) и американских (>4) серотипов, АГ связанных между собой (13). Сероспецифические эпитопы вируса локализованы, в основном, в первых 300 аминокислотных остатках пепломерного белка S (27). На поверхности ВИБ обнаружено 5 АГ эпитопой: А, В, С, D и Е, из которых первые 4 ответственны за нейтрализацию вируса. Из 16 монАТ все реагировали с белками пепломеров, а один тип АТ нейтрализовал инфекционность и подавлял Г A-активность вируса (33).

Антигенная активность.

ПА появлялись в сыворотке крови через 2-3 нед, но исчезали раньше, чем ВНА. При повторном заражении уровень ПА повышался. У экспериментально инфицированных 8-нед цыплят они были выявлены на 10-й день и сохранились в течение 10-14 дн, после чего процент цыплят, положительно реагирующих в РДП, постепенно снижался. Через месяц после заражения только 39,5% цыплят имели ПА, а через 2 мес они не были выявлены ни в одной исследованной сыворотке. В крови кур-реконвалесцентов найдены КСА.

Антигенная вариабельность и родство. Показана АГ- и иммуногенная вариабельность полевых штаммов ВИБ. Четко определены 7 серотипов: A(D207), B(D3896), C(D31 28), D(D212), Массачусетс (Mass), ИК11 и ИК12. В пределах указанных серотипов известны следующие штаммы: Массачусетс-41, Коннектикут А5968, Айова-97, Айова-609, Грей, Холт, УМК Армиленд, Брисбеин, КН, Нерима, Ишида, Шида.

Выделен АГ вариант вируса, который отнесен к типу Индиана, и новый нефропатоген- ный АГ отличный вирус Р-84084. Антисыворотка к шт. Коннектикут А5968 нейтрализует все вышеуказанные гетерологичные штаммы, за исключением шт. Ишида. С помощью фин- герпринтного анализа (теста “отпечатки пальцев") нуклеотидов РНК датских штаммов выделены 2 группы вирусов. В 1-ую группу из них вошли шт. Н52, Н120, D387, 1259, 1385, 1397, у которых установлено 99% гомологии; во 2-ю - шт. D207, D274, D212, D1466, D3128, D3896, имевшие 95% гомологии.

Спектр патогенности вируса. К ВИБ в естественных условиях восприимчивы куры всех возрастных групп, наиболее восприимчивы до 30-дн возраста. Человек восприимчив к ИБ и переболевает с легкими признаками поражения верхних дыхательных путей.

Локализация вируса, вирусовыделение. Развитие инфекционного процесса сопровождается виремией с локализацией вирусного АГ в лейкоцитах и эритроцитах в течение 16 дн после заражения. Вирулентные штаммы вируса инфицируют и разрушают реснитчатые эпителиальные клетки, выстилающие трахею. Вирус локализуется в субэпителиальных клетках и обнаруживается в них в течение 21 дня, и в селезенке - до 49 дн. Авирулентный вирус локализуется там же, но инфицирует только часть эпителиальных клеток. У птиц, зараженных контактно, вирус обнаруживают в глотке и трахее через 7, 14, 21 и 27 дн, а в почках - через 35 дн. У цыплят, зараженных ингратрахеально, вирус в трахеальной слизи выявляли в течение 5 нед после заражения. Показана возможность вирусоносительства переболевшей птицы. Наличие инфекции в одном и том же хозяйстве в течение ряда лет свидетельствует о том, что выздоровевшие птицы остаются носителями вируса.

Персистенция ВИБ, ее сроки зависят от штамма. Так, шт. Ка?ОБЫта-34 размножался и персистировал, в основном, в почках, а шт. Тойоп-2 дольше персистировал в легких.

Экспериментальная инфекция. Ее можно вызвать при ингратрахеальном, интрана- зальном, подкожном, внутримышечном, инграперитонеальном и клоачном заражениях цыплят. Однако интратрахеальный метод заражения более надежный. Инкубационный период продолжается 18-36 ч, но может затянуться до 6 дн и более, если инфицируют цыплят, содержащих материнские АТ. Длительность инкубационного периода зависит также от дозы и пути введения вируса. При аэрозольном методе заражения симптомы болезни у цыплят проявляются уже через 18-24 ч.

После инфицирования респираторного тракта ВИБ локализуется и размножается в эпителиальных клетках яйцевода и остается там в течение 6-24 дн после инфекции. Инфицированный яйцевод становится инфантильным или кистозным. Вирус персистирует в организме кур не менее 30-45 дн. Из клоаки его выделяют чаще, чем из трахеи.

Кроме цыплят можно заразить обезьян макака-резус и пещерных летучих мышей. Индейки невосприимчивы, однако при интравенозном введении вируса возникает виремия в течение 48 ч. Мышата-сосуны восприимчивы к шт. Боддет при итрацеребральном заражении. Штаммы, прошедшие небольшое число пассажей на КЭ, для мышей непатогенны.

Культивирование. Удается в КЭ при заражении в аллантоисную полость, амнион или на ХАО. Адаптация ВИБ к КЭ происходит параллельно с возрастанием процента и сокращением срока гибели их. Заражают обычно 9-10-дн КЭ. Адаптация вируса наступает через 3-6 и более пассажей. Зараженные КЭ погибают через 3-6 дн в 1-м пассаже до 10%, в 5-м - до 61 ив 9-м - до 83% и более. Однако гибель КЭ - не единственный признак заражения ВИБ. Характерно замедление их роста через 6-7 дн после заражения и увеличение количества экстраэмбриональной жидкости. Инфицированные КЭ шарообразной формы, мумифицированы, мельче, чем здоровые. Такой "эффект карликовости" - патогномоничный признак для ВИБ, имеет диагностическое значение при выделении полевых изолятов на КЭ (Рис. 28). Кроме того, у инфицированных КЭ желток обычно сморщен, постоянно поражены почки и повышено содержание уратов. ХАО и амниотическая оболочки отечны, объем аллантоисной жидкости увеличен. При введении вируса в аллантоисную полость наивысшая концентрация его обнаруживается через 36 ч после заражения в ХАО, затем в аллантоисной жидкости, амнионе и печени эмбриона. Если погибшие эмбрионы остаются на некоторое время в инкубаторе, титр вируса снижается (4).

Максимальный выход вируса 107,2 ИД50/о,1мл выявляется при заражающей дозе 103 ЭИД5о/о,1 мл в условиях 36°С. Более высокие заражающие дозы не увеличивают общего «урожая» вируса. Подбор оптимальной температуры и продолжительности культивирования является важным для повышения «урожая», если иметь в виду, что в аллантоисной жидкости погибших КЭ обнаружено интерферирующее вещество. Различные штаммы ВИБ могут при изменении температуры проявлять различную вирулентность для КЭ и органных культур, что отражает их вирулентность и тропизм. Большинство штаммов вируса размножается в культуре клеток почки КЭ, фибробластов КЭ и ВНК-21. В клетках HeLa никакие штаммы ВИБ не размножались. Органные культуры яйцеводов оказались высокочувствительными к инфицированию вакцинным шт. Н52. Однако, прежде чем вирус приобретает способность размножаться в первичной культуре клеток и органных культурах трахеи кур, его нужно адаптировать к КЭ. Вирус, адаптированный к мозгу мышей-сосунов, может обусловить прямую реакцию ГА и реплицироваться в клетках Vero. Титры вируса в этой культуре достигают 4,6-5,0-104 БОЕ/мл. Культура клеток легкого и почек КЭ в 40-60 раз чувствительнее культуры клеток печени. Вирус также можно культивировать в органной культуре трахеи КЭ. ЦПД его в культуре клеток почки КЭ проявляется образованием синцития с последующим некрозом. Синцитий появляется через 6 ч, а через 18-24 он увеличивался, включая 100 и более ядер.

Все шт. ВИБ в присутствии трипсина в среде покрытия 20-40 мкг/мл на 3-4-й день инкубации образуют бляшки до 6 мм в диаметре. Титр вируса в присутствии трипсина для разных штаммов достигает 3,3105 БОЕ/мл. Все изученные 17 австралийских штаммов ВИБ образовывали бляшки на 2-м пассаже в культуре клеток почки КЭ, которые различались по срокам их появления, размерам (от 2 до 5 мм) и внешнему виду. Хотя метод культивирования на КЭ в 18-84 раза более чувствителен метода бляшек, однако титрование методом бляшек оказалось более точным. Половые гормоны (эстраген, тестостерон, кортизон) повышают продукцию вируса в органных культурах трахеи (6). Из многих штаммов шт. Beaudette индуцирует бляшки в культуре клеток ВНК-21, на этих клетках из этого штамма, после обработки его мутагеном, был изолирован ts-мутант.

ГА свойства. Большинство штаммов ВИБ не агглютинируют эритроциты птиц, однако при обработке вируса фосфолипазой С типа 1 он легко вызывает Г А. Энзим модифицирует оболочку вируса за счет разрушения фосфолипидов и вызывает появление на поверхности вириона ГА (30). Кроме того, ГА-свойства обоих типов ВИБ проявляются после обработки их 0,5% р-ром трипсина (90 мин при 37°С), который разрушает пептидные связи аргинина и лизина поверхностных молекул вирусного белка и освобождает скрытые молекулы ГА. Однако было показано, что у глубоко адаптированных к КЭ штаммов (подобных шт. Beaudette), имеющих высокий инфекционный титр после обработки трипсином, фосфолипазой С, нейраминидазой ГА активность не проявляется. Феномен объясняется изменением физической и химической структуры вирусного белка, связанной с потерей патогенности и иммуногенности вируса для птицы. В настоящее время уточнено, что шт. Коннектикут (Konnekticut) способен агглютинировать эритроциты кур, в то время как шт. Массачусетс (Massachusets) подобную активность проявляет только после обработки трипсином или фосфолипазой С. Отработан метод изготовления Г А антигена из изолятов ВИБ. Лиофилизи- рованный ГА сохранял активность при -20°С в течение 8 нед, при 4°С в эти же сроки терял до 50% ее. Титр ГА вируса повышается до 1:256 - 1:512 при его пассажах в трахее кур или клеточной культуре трахеи кур.

Гемадсорбирующие свойства не установлены.

Интерфероногенная активность. Штаммы ВИБ различаются по интерферониндуци- рующей способности. Так, из 10 штаммов только 3 (шт. IB-41, Нерима и Ишида) не индуцировали синтез интерферона в КЭ, тогда как остальные вызывали образование его до 190 ед.