Определение соматических клеток в молоке с применением вискозиметра ВМЛК. 

Реактив: раствор «Мастоприм».

рованной водой, подогретой до 30—35 °С до метки. Перед применением раствор взбалтывают. Годен в течение 1 сут.

Оборудование: вискозиметр ВМЛК; пипетки на 5 и 10 мл; колбы или цилиндры на 100 мл; весы лабораторные рычажные не менее 3-го класса точности, наибольший предел взвешивания 100 г, поверочная цена деления 0,001 г; термометры технические прямые № 4; стаканы химические на 50 и 500 мл.

Ход определения.Т емпература в лаборатории должна быть 10—30 °С, кислотность исследуемого молока 16—21 °Т. В сосуд вискозиметра вносят 5 мл водного раствора препарата «Мастоприм» массовой концентрации 35 г/л и 10 мл исследуемого молока, тщательно профильтрованного через четыре слоя марли. Нажимают кнопку «Пуск» и перемешивают смесь в течение 30 с. По окончании перемешивания через капилляр вытекает смесь с раствором «Мастоприм». Время вытекания определяют таймером. После анализа смеси сосуд прибора 2—3 раза промывают дистиллированной водой и 4—5 раз продувают с помощью резиновой груши. После очистки сосуда прибор считается подготовленным для исследования последующей пробы молока.

Количество соматических клеток в пробе молока устанавливают по времени вытекания смеси в соответствии с условиями, описанными в таблице 42.

42. Зависимость количества соматических клеток от скорости вытекания смеси молока с реактивом «Мастоприм»

Время вытекания смеси, с

Количество соматических клеток, тыс/мл

Время вытекания смеси, с

Количество соматических клеток, тыс/мл

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений.

Анализатор молока вискозиметрический «Соматос» фирмы

ООО              «Био Тест» (Украина, г. Донецк) предназначен для определения количества соматических клеток в молоке по условной вязкости, измеряемой по времени вытекания контролируемой пробы через капилляр. Принцип работы этого прибора такой же, как и вискозиметра ВМЛК.

Диапазон определения количества соматических клеток в 1 см3 молока на приборе «Соматос» 90—1500 тыс.; относительная пог

решность измерения условной вязкости не более 5 %; продолжительность одного анализа не более 4 мин.

Анализатор молока вискозиметрический «Соматос» Научно-производственного объединения «Петролазер» (Россия, Санкт-Петербург) по работе и техническим характеристикам не отличается от описанного выше анализатора.

Источник'. 71.

Помимо определения общего количества соматических клеток молока (секрета в сухостойный период) возможна их дифференциация. С этой целью предложен способ приготовления и окраски препаратов из молока и секрета молочных желез для микроскопи- рования клеток, обеспечивающий окрашивание и сохранение структуры клеточных элементов (К. Н. Кондрахина, Г. А. Симо- нян. Авторское свидетельство № 400314). К 15—18 мл свежевыдо- енного молока (секрета) добавляют одну каплю 40%-ного раствора формальдегида и тщательно перемешивают. Затем отбирают 5 мл молока, вносят в центрифужную пробирку, центрифугируют 10 мин при 3000 мин . С поверхности снимают слой жира, выливают над- осадочную жидкость, к осадку добавляют 0,5—1,0 мл сыворотки крови крупного рогатого скота и встряхивают до полного взмучивания осадка. После этого доливают сыворотку до объема З—4 мл и снова центрифугируют в течение 7—8 мин при 3000 мин *. Над- осадочную жидкость сливают, оставшийся осадок тщательно перемешивают путем встряхивания до полного взмучивания.

5. мин и окрашивают краской Романовского, которую готовят перед употреблением на водопроводной воде с pH, близкой к нейтральной (1 капля краски на 1 мл воды). Дифференцируют клетки под микроскопом с окуляром 7 или 10 и объективом 90.

Источник: 36.

Клиническое значение. Подсчет соматических клеток проводят главным образом для выявления маститного молока, а также оценки генетического потенциала продуктивности животных. Содержание соматических клеток у здоровых коров в период выделения нормального молока (285—290 дней) составляет 50—800 тыс/мл. В молоке с примесью молозива или в молоке, полученном в последние 7 дней лактации (стародойное), количество соматических клеток превышает 800 тыс/мл. Сборное молоко высшего сорта содержит не более 400 тыс/мл, молоко высшего сорта — не более 500, первого сорта — до 600 и несортовое — не более 800 тыс/мл соматических клеток.

В сухостойный период количество соматических клеток в секрете здорового вымени увеличивается в десятки и сотни раз. При субклиническом мастите их содержание в молоке колеблется от 0,96 до 16,0 млн/мл; серозном — 1,00—64,0, катаральном — 1,05—23,0, гнойном — 1,50—300 млн/мл (К. Н. Кондрахина).

Большинство ученых считает, что подсчет соматических клеток (в основном лейкоцитов) в молоке — наиболее эффективный и ранний метод выявления скрытых форм мастита.

Определение количества соматических клеток — обязательно, поскольку этот показатель введен в качестве основного при установлении сортности заготавливаемого молока. В молоке выявлена четкая зависимость между увеличением этого показателя и снижением продуктивности. По некоторым данным, при наличии в молоке от 500 тыс. до 1 млн соматических клеток в 1 мл продуктивность коров снижается на 10 %, до 5 млн/мл — на 30 % (ФРГ).

Определение в молоке (молозиве) кетоновых тел, общего кальция, неорганического фосфора, магния, мочевины, витамина А. Перечисленные показатели определяют в обезжиренном молоке (молозиве). [Метод обезжиривания молока (молозива) изложен в начале раздела.]

Определение кетоновых тел в обезжиренном молоке {молозиве) проводят ионометрическим методом (см. Исследование крови).

Повышенную концентрацию кетоновых тел в молоке (молозиве) можно установить с помощью специальных тест-пластин, реактива Лестраде, Ланге й других, в основе которых лежит реакция натрия нитропруссида с ацетоуксусной кислотой и ацетоном в щелочной среде с появлением сиреневой окраски. Тест-полоску или реактив смачивают молоком (молозивом) и через 30—40 с оценивают изменение цвета, его интенсивность. Чем интенсивнее цвет, тем выше концентрация кетоновых тел в исследуемой пробе.

Чувствительность методов с натрия нитропруссидом около 10 мг/100 мл. Такая концентрация ацетоновых тел в молоке (молозиве) бывает при развитии кетоза.

Определение кетоновых тел в молоке (молозиве) проводят по той же методике, что и при обнаружении их в крови и моче.

Определение общего кальция в обезжиренном молоке (молозиве) можно проводить комплексонометрическим методом с индикатором флуорексоном (см. с. 76) или мурексидом (см. с. 79), неорганического фосфора с ванадат-молибденовым реактивом (см. с. 82), с аскорбиновой кислотой (см. с. 84), магния — по цветной реакции с титановым желтым (см. с. 86), мочевины — по цветной реакции с диацетилмонооксимом (см. с. 100).

Витамин А в цельном молоке (молозиве) определяют по методу Бессея в модификации А. А. Анисимовой и В. И. Левченко (см. с. 186).

Клиническое значение. Показатели молока и молозива здоровых коров приведены в приложении 9.

Нами (И. П. Кондрахин) установлено, что содержание кетоновых тел и мочевины в молоке и молозиве коров находится в прямой зависимости от содержания этих веществ в крови. При этом концентрация кетоновых тел и мочевины в крови и молоке идентична. Резкое повышение кетоновых тел в молозиве и молоке (выше 10—12 мг%) отмечается при острой стадии кетоза, которая обычно бывает в первые 100 дней лактации. В последующем, при переходе острой формы кетоза в хроническую, уровень кетоновых тел приближается к верхней границе нормы (8 мг%). При заболевании коров кетозом содержание мочевины в молоке снижается, что связано, очевидно, с уменьшением мочевинообразовательной функции печени. Таким образом, показатели кетоновых тел и мочевины в молозиве и молоке могут служить диагностическими тестами при кетозе. Концентрация мочевины в молоке и молозиве повышается при поступлении в организм больших количеств нитратного азота.

Содержание витамина А в молозиве и молоке также находится в прямой зависимости от концентрации его в крови. Поэтому степень обеспеченности организма витамином А можно оценивать по концентрации его в молозиве и молоке.

Что касается кальция, неорганического фосфора, магния, то содержание их в молозиве и молоке имеет меньшее клиническое значение, предпочтение отдается определению их в сыворотке крови.