Определение белкового и небелкового (остаточного) азота в жидкости рубца.  

Реактивы: 0,3 н.

5%-ный ZnSO,*;

фенолфталеин (индикатор);

остальные реактивы те же, что и при определении общего азота.

Оборудование: центрифуга; колбы Кьельдаля на 100 мл; прибор Кьельдаля для перегонки пробы; пипетки, бюретки; электроплитка.

Ход определения. Для осаждения белков в центрифужную пробирку наливают рубцовую жидкость определенного объема (например, 2 мл). Туда же добавляют такое же количество 0,3 н. раствора Ва(ОН)г и аналогичный объем 5%-ного раствора цинка сульфата. Реактивы предварительно должны быть оттитрованы, т. е. должны точно нейтрализовать друг друга по фенолфталеину (объем на объем). Смесь тщательно перемешивают и центрифугируют 15 мин при 3000—5000 мин *. 3 мл центрифугата, соответствующего 1 мл рубцовой жидкости, переносят в колбу Кьельдаля, заливают 3 мл концентрированной серной кислоты. Сжигание пробы и отгонку аммиака проводят так же, как и при определении общего азота. Учитывая, что концентрация небелкового азота в содержимом рубца не превышает 60 мг/100 мл, в приемную колбу достаточно налить 10 мл 0,01 н. раствора серной кислоты.

Расчет содержания небелкового азота, как и общего азота, ведут по формуле

х= (А — Б) • 0,14 • 100,

где х — концентрация небелкового азота, мг/100 мл; А — количество 0,01 н. раствора H2SO4 в приемнике, мл; Б — количество 0,01 н. раствора NaOH, пошедшего на титрование, мл.

Определение белкового азота. Белковый азот определяют по разнице общего и небелкового азота.

Количество небелкового азота в рубцовой жидкости крупного рогатого скота составляет 15—60 мг/100 мл, овец — 10—50 мл/100 мл, небелкового соответственно 35—200 и 40—240 мг/100 мл.

Определение аммиака (аммонийного азота) с реактивом Нессле- ра.

Оборудование: спектрофотометр или фотоэлектроколориметр; центрифуга.

Ход определения. Микропипеткой отбирают 20 мкл от- центрифугированной жидкости рубца, переносят в пробирки, в которые предварительно набирают по 5 мл дистиллированной воды, перемешивают. Добавляют по 0,2 мл реактива Несслера и вновь перемешивают. Пробы, в которых цвет стал желтым, через 10 мин спектрофотометрируют при длине волны 410 нм. Оптическую плотность измеряют против контрольной пробы, в которую входят те же ингредиенты, но вместо рубцовой жидкости 20 мкл дистиллированной воды. Таким же образом обрабатывают 20 мкл стандартного раствора, используя с этой целью аммония сульфат. Готовят его из расчета 0,4716 г перекристаллизованного (N114)2804 на 1 л бидистиллированной воды. В 1 мл такого раствора содержится 100 мкг азота (в 20 мкл — 2 мкг).

Расчет количества аммиака в жидкости рубца ведут по формуле

х — ЕПА/ Ес,

где х — количество аммиака в пробе, мкг; Еп — экстинкция пробы; А — количество аммиака в стандартном растворе, мл; Ес — экстинкция стандарта.

Источник: 53.