ГЛАВА 11. Экспресс-методы химико-токсикологического исследования

материала

Основными методами извлечения адов являются экстракция жидкостями, изоляция минерализацией и отгонкой с водяным паром.

зависимости от растворимости ядовитых веществ для экстракции используют воду, ацетон, хлороформ и другие растворители.

Подготовка материала для исследования

Нужно помнить, что от правильной подготовки материала для исследования часто зависит и правильность постановки диагноза. Для получения объективных данных присланные в лабораторию материалы (внутренние органы, остатки корма и т. д.) измельчают и исследуют раздельно.

Если объект исследования содержат спирт в качестве консервирующего материала или много воды (рвотные массы, силос и др.), то его подщелачивают карбонатом натрия, помещают в фарфоровую чашку и подсушивают на кипящей водяной бане.

Количество материала, которое берут для исследования, зависит от ряда факторов. В частности, если известно, что после интоксикации животного прошло длительное время или интоксикация протекала хронически, нужно взять как можно больше материала (500 г патологического материала или 1 кг грубого корма). В этом случае материал следует разделить на 3-4 порции, провести минерализацию отдельно каждой, а затем минерализацию объединить. Когда такие данные отсутствуют, для исследования берут 100 г материала.

Минерализацию необходимо производить под тягой, так как при сгорании органических веществ выделяются сернистый газ, серный ангидрид и другие токсичные газы. При проведении химико-токсикологического анализа используют общие методы минерализации (с помощью кислот) и частные (сухая минерализация).

В сельском хозяйстве широко применяют различные ядохимикаты, в частности, хлорокись меди, медный купорос, бордоская жидкость, хлористый цинк, фосфид циника, углекислый барий, углекислый свинец, гранозан, сулема и др.

В целях ускорения токсикологических исследований при проведении лабораторной диагностики интоксикаций животных металлическими токсинами разработаны экспресс-методы их обнаружения. В этом случае, например для обнаружения бария, свинца, цинка, меди и ртути, требуется всего один час времени. При этом для исследований на цинк, ртуть и медь, а одной стороны, а также барий и свинец с другой, используются различные методы минерализации патологического материала.

Метод минерализации патологического материала для исследования на

цинк, ртуть и медь Для исследования на цинк, ртуть и медь, разрушение материала проводят концентрированной серной кислотой и пергидролем. Для этого берут 20 г (5 г) исследуемого материала (корм, содержимое желудка, (кусочки внутренних органов и т. д.), измельчают и переносят и колбу Къельдаля, заливают 10-12,5 (2-3) мл пергидроля и перемешивают в течение 1-2 мин. Затем добавляют 6-7 мл (2-3) концентрированной серной кислоты. Начинается реакция с образованием пены и содержимое колбы разогревается.

После ослабления реакции закрепляют колбу Къельдаля в штативе и подопревают под вытяжной на медленном огне. Периодически в колбу добавляют то 1-2 мл пергидроля до тех пор, пока содержимое не станет относительно прозрачным (полного разрушения органического вещества не происходит - остаются жир и некоторые продукты распада белков). Следует иметь в виду, что для разрушения 20-25 г материала требуется примерно 25-40 мин.

Полученный прозрачный минерализат в горячем виде фильтруют через бумажный фильтр, предварительно замоченный водой. Осадок на фильтре 23 раза промывают горячей дистиллированной водой. Полученный фильтрат доводят до 200 мл (50) дистиллированной водой комнатной температуры и приступают к исследованию.

Метод минерализации патологического материала для исследования на барий и свинец

Для исследования на барий и свинец разрушение патологического материала и кормов проводят концентрированной соляной кислотой и хлоратам калия (бертолетовой солью), чтобы избежать образования трудно растворимых сернокислых солей бария и свинца, выпадающих в осадок.

Навеску материала весом 20-25 г (5 г) измельчают и переносят в колбу Къельдаля, заливают концентрированной соляной кислотой в таком объеме, чтобы весь материал был догружен в кислоту.

Экспресс-методы обнаружения токсичных метеллов (цинк, ртуть, медь, барий и свинец)

Обнаружение цинка

На часовое стекло берут 3-4 капли минерализата и нейтрализуют 25% раствором аммиака (по лакмусу).

Далее одну каплю нейтрализованного раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанную ранее насыщенным раствором тиомо- чевины. Подсушивают над горлышком склянки с концентрированным аммиаком. На фильтровальную бумажку с каплей минерализата (на область пятна) наносят каплю раствора дитизона в бензоле. При наличии цинка на бумаге появляется пятно розовато-красного или красно-малинового цвета.

В контрольном опыте вместо минерализата берут дистиллированную воду и проделывают все операции основного опыта. Пятно на бумаге не должно окрашиваться в розовый или красно-малиновый цвет. Нормально присутствующий в органах цинк в этих условиях не обнаруживается.

Обнаружение ртути

На полоску фильтровальной бумаги наносят кашлю взвеси йодистой меди, подсушивают на воздухе 2-3мин искапают на это место одну каплю исследуемого минерализата.

В присутствии ртути появляется красное или красно-оранжевое окрашивание. Параллельно ставят контрольный опыт. Реакция высокочувствительная и позволяет обнаружить 0,25 мкг ртути в одной капле.

Обнаружение меди

На чистое стекло берут 3-4 капли минерализата и нейтрализуют концентрированным аммиаком (по лакмусу).

Каплю нейтрализованного раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, предварительно пропитанной растворам кремнекислого натрия и высушенной.

Далее бумажку в течение минуты выдерживают над горлышком склянки с концентрированным аммиаком, подсушивают и наносят 1-2 капли ру- беановодородной кислоты (в то место, куда нанесли минерализат).

В присутствии меди пятно окрашивается в темно-зеленый цвет. Постановка контрольного опыта обязательна.

Обнаружение бария

На часовое стекло берут 3-5 капель минерализата и нейтрализуют концентрированным аммиаком.

Каплю нейтрализованного раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, предварительно пропитанной 4% раствором виннокислого натрия и высушенной, подсушивают на воздухе и наносят каплю родизоната натрия, а затем - буферного раствора с pH 2,8.

В присутствии бария образуется оранжево-красное пятно, но такое же пятно может появиться и при наличии небольшого количества свинца. Для дифференциации на оранжево-красное пятно от родизоната натрия наносят каплю 10% раствора сернокислого натрия: при наличии бария окраска исчезает. Если же присутствует свинец, окраска пятна не меняется.

Обнаружение свинца Каплю мпнералпзата наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанной 4% раствором виннокислого натрия и высушенной, держат над горлышком склянки с концентрированным аммиаком. Далее подсушивают на воздухе и наносят каплю родизоната натрия, а затем - буферного раствора с pH 2,8. В присутствии свинца пятно окрашивается в фиолетовый цвет.