МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ

Митохондрии этиолированных проростков сон сорта Приморская выделяли следующим образом: гипокотили растирали в ступке с 1,5—2-кратным объемом раствора I (сахароза — 0,4М, трис — 0,1М, ЭДТА — 0,005М п КН2Р04 — 0,0Ш; pH 8, 0).

Митохондрии нз надземных органов зеленых растений гороха сорта Пионер выделяли аналогичным способом с той лишь разницей, что растворы I, II и III имели pH 7А. Все операции проводили при 0° С — (+4° С).

Поглощение кислорода (АО) определяли манометрическим методом Варбурга, а убыль неорганического фосфата (АР) — методом Лоури и Лопеза [15] в модификации Скулачева [16]. При изучении окислительного фосфорилирования митохондрий, выделенных из этиолированных игаокотплей сои. каждый сосудик содержал (мкМ): трис (pH 7,5) — 46,0; сахарозы — 234,0; КН2РО4 — 40,0; ]^С12 — 15,6; АТФ — 3,0; глюкозы — 26,0; КаР — 15,0; сукцината калия (pH 7,4) — 52,0; 0,2 мл гексокиназы, по Солсу [17], катализовавшей перенос 14,55 мкМ терминального фосфата АТФ за 10 мин., и суспензию митохондрий из расчета

1. 7—2,6 мг общего азота, определенного микрометодом Кьельдаля. Объем смеси составлял 3 мл (pH 7,1—7,2). В центральный отросток помещали 0,2 мл 20%-ной КаОН.

В случае использования митохондрий из зеленых растений гороха смесь содержала (мкМ): трис — 50,0; сахарозы — 234,0; КН2РО4 — 40,0; ^С12 — 15,6; АТФ — 3,0; глюкозы — 150,0, а также 4 мг кристаллической гексокиназы (600 ед.) и митохондрии из расчета 4,3 мг общего азота. Объем инкубационной смеси 3,3 мл.

Преинкубация продолжалась 5—7 мин., а инкубация при 25 С — 20 мин. По окончании инкубации к 1 мл смеси прибавляли 3 мл холодной 7,5%-ной ТХУ. Фильтровали на холоду и в фильтрате определяли содержание неорганнческого фосфата.

Количество галоидфепоксикислот определяли по следующей методике: высушенный образец весом не более 1 г сплавляли при 207° С с 10—20-кратным количеством солянокислого ипри- дина в течение часа для дезалкилирования галоидфепоксикислот. После охлаждения содержимое переносили водой в отгонную колбу, подкисляли 10 мл концентрированной НС1 п отгоняли галоидфеполы водяным паром в приемник с 25 мл 1 н. 5\тН4ОН. Отгонку продолжали до тех пор. пока объем дистиллята пе достигал 500 мл. Дистиллят подкисляли о мл той же НС1 и экстрагировали фенолы тремя порциями (по 50 мл) петролейного эфира. Объединенный эфирный экстракт промывали трижды по 25 мл дистиллированной водой, а фенолы экстрагировали тремя порциями (10 + 5 + 5 мл) 0,05 н. раствором КН4ОН. Аммиачный экстракт переносили в мерную колбу на 50 мл и добавляли 20 мл буфера (70 мл 0,7 М К2НРО4 + 30 мл 0,7 М КН2РО4 + 200 мл С2Н5ОН + вода до 1 литра), 1 мл свежеприготовленного 1%-ного раствора 4-аминоантипприна и 1 мл свежеприготовленного 2%-ного раствора Кз|Те(С]Ч)б]. Колбу доводили до метки водой и после стабилизации окраски определяли экстинкцию раствора при 515 ммк. О содержании галоидфепоксикислот судили по разности величин экстинкций опытного и контрольного (без гербицидов) образцов [18—21].

В исследованиях использовали химически чистые реактивы и галоидфеноксикислоты.