О порядке испытаний и оценке эффективности антигельминтиков

Испытание антигельминтиков и их новых лекарственных форм широко проводятся как в нашей, так и в других странах. Часто эффективность одного и того же препарата в той же дозе оказывается неодинаковой по данным разных авторов, что, по- видимому, обусловлено использованием разных методов испытаний, погрешностью при оценке эффективности, либо появлением резистентных штаммов гельминтов и другими факторами.

Материалом для обобщения данных по этому вопросу служили собственные опыты (И.А. Архипов, 2002; 2003) и данные литературы, главным образом, руководства по оценке эффективности антигельминтиков для жвачных (J.R. Wood et al., 1995), свиней (D. Duwel et al., 1986), плотоядных (D.E. Jacobs et al., 1994), лошадей (J.L. Duncan et al., 1988), одобренных Всемирной ассоциацией за прогресс ветеринарной паразитологии.

В связи с этим требовалось установление единых стандартных методов испытания и оценки эффективности, позволяющих объективно, быстро и с меньшими затратами оценить профилактические свойства того или иного средства. Порядок испытаний и оценки эффективности антигельминтиков опубликованы И.А. Архиповым, М.Б. Мусаевым (2004).

Испытание препаратов проводится как на экспериментально, так спонтанно инвазированных животных в период пика инвазии.

Всемирная ассоциация за прогресс ветеринарной паразитологии (ВАПВП) рекомендует классифицировать антигельминти- ки по эффективности на следующие категории: высокоэффективные - имеющие активность свыше 98 % , эффективные (90-98 %), умеренно эффективные (80-89 %) и недостаточно или неэффективные (ниже 80 %). Препараты должны дозироваться строго на кг массы тела животных.

При испытании важными моментами являются формирование и содержание подопытных групп животных, их мечение, дозирование препаратов и оценка эффективности.

Как правило, после предварительных исследований проб фекалий, крови, кожи или слизистой жидкости формируют подопытные и контрольные группы животных не менее 7-10 голов в каждой. При одновременном испытании нескольких препаратов или доз можно ограничиться одной контрольной группой. Животные контрольной и подопытных групп должны быть подобраны строго по принципу аналогов с учетом пола, породы, возраста, массы тела, степени зараженности (количеству яиц, личинок гельминтов в грамме фекалий).

Животные всех групп должны находиться в одних и тех же условиях кормления и содержания за 14 суток до и в течение опыта. Водой они обеспечиваются вволю. При титрации дозы животные должны находиться на стойловом содержании во избежание возможного заражения. Рацион составляют с учетом местных условий кормления, вида и возраста животных.

Против Strongyloides spp. и Toxocara spp. препараты испытывают на молодых животных.

Перед испытанием препаратов каждое животное обязательно метят двумя ушными бирками или татуировкой. Для разных групп целесообразно использовать метки разного цвета. Иногда используют ошейники с номерами, а для птиц кольца или алюминиевые пластинки, обертываемые вокруг ног.

В период опыта ежедневно учитывают клиническое состояние животных и регистрируют все изменения и применяемые средства для поддержания их здоровья.

После определения терапевтической дозы при индивидуальном назначении в расчете на 1 кг массы тела приступают к испытанию препарата путем групповой дачи с кормом или водой, как правило, в более высокой дозе, чем при индивидуальной даче, при этом лучше назначать препараты после 8-12-часового голодания и наблюдают за тем, чтобы лечебный корм полностью был съеден животными.

При проведении опытов по титрации терапевтической дозы необходимо знать химические свойства препарата, содержание действующего вещества и вспомогательных компонентов, входящих в состав лекарственной формы, а также веществ- контаминантов, образующихся при синтезе.

При испытании проб препаратов учитывают идентификационный номер, содержание ДВ, размер частиц, дату изготовления и условия хранения.

В отдельных случаях при изменении лекарственной формы, способа введения, концентрации или схемы применения проводится опыт по установлению эквивалентности (эффективности) антигельминтика в сравнении с базовым. Дополнительным критерием биоэквивалентности препарата служит определение его концентрации в крови или фармакокинетика.

На продолжительность опыта по испытанию препаратов влияет его назначение, т.е. с какой целью применяют препарат: терапевтической или профилактической. Антигельминтики для терапии животных применяют перорально (в форме суспензии, пасты, болюсов, с кормом или водой), парентерально (подкожно, внутримышечно, интраруминально), местно (трансдемально) в форме мази, poor on, spot on, спрея, пластыря. Продолжительность опытов при испытании этих препаратов обычно короткая и зависит от персистентности их действия.

Антигельминтики, назначаемые с профилактической целью, применяются, в основном, в форме болюсов или устройств замедленного, пролонгированного или пульсирующего действия, которые предотвращают заражение животных в пастбищный период и контаминацию пастбищ. Как правило, опыты по испытанию профилактических препаратов более продолжительны, чем терапевтических средств.

При испытании антигельминтиков используют «контрольный текст» и «критический тест».

«Контрольный тест» является наиболее надежным методом учета антигельминтной эффективности и рекомендуется для определения терапевтической дозы, а также в опыте по подтверждению этой дозы. В этом тесте эффективность антигельминтиков определяют путем сравнения результатов в группе леченых и нелеченых животных. Через определенный период времени животных вскрывают, обнаруженных паразитов идентифицируют и подсчитывают.

Интенсэффективность определяют по формуле

ИЭ = (К-Л) / К* 100, где К - среднее геометрическое количество паразитов у животных кон- трольной группы; Л - среднее геометрическое количество паразитов у животных (леченых) подопытной группы.

Использование среднего геометрического количества позволяет точно представить распределение популяции гельминтов внутри группы животных и дать более объективные показания степени эффективности препарата. По указанной формуле можно рассчитать эффективность на основе снижения яиц или личинок гельминтов в г фекалий.

В ряде случаев используют показатель экстенсэффективно- сти (ЭЭ) — количество животных (% от числа леченых), полностью освобожденных от гельминтов.

«Критический тест» часто используют при испытании антигельминтиков на собаках, лошадях и свиньях, у которых гельминты выделяются в состоянии, позволяющем их идентифицировать. Эффективность препаратов в этом тесте определяют путем сравнения количества паразитов, выделенных с фекалиями после лечения животных, с количеством оставшихся гельминтов, обнаруженных при вскрытии. «Критический тест» не рекомендуется применять при испытании препаратов против нематод жвачных животных за исключением Oesophagostomum spp. и Chabertia spp.

При испытании препаратов против желудочно-кишечных нематод учитывают активность против взрослых, личиночных стадий и гипобиотических личинок. Как правило, испытания проводят на экспериментально инвазированных животных. Перед заражением их исследуют и в случае обнаружения инвазии дегельминтизируют препаратом широкого спектра действия (кроме ивермектинов) в два раза увеличенной дозе. Животных содержа!' в стойле в условиях, исключающих спонтанное заражение.

Дозы заражения животных инвазионными личинками нематод представлены в таблице 11.1. При заражении животных нематодами нескольких видов дозу заражения снижают на 29-50 %. Опыты по определению эффективности препаратов против гипобиотических (задержавшихся в развитии) личинок остертагий, гемонхов, кооперий проводят на спонтанно инвазированных животных или при экспериментальном заражении личинками, подвергнутыми охлаждению (М. Eysker, 1981).

Для экспериментального заражения личинки нематод получают методом Бермана из фекалий животных или путем отмывания их из фекалий и используют для заражения в возрасте 7-10 сут, а личинки S.

11.1. Доза заражения жвачных животных при испытании антигельминтиков против нематод               (тыс. экз. инваз. личинок/голову)             

Для оценки эффективности препаратов против разных стадий гельминтов необходимы знания сроков развития личинок 4 и 5-й стадий и имаго, что позволяет определить оптимальный срок введения препарата против личинок этих стадий и взрослых нематод (табл. 11.2).

Препарат задают животным в определенный день после заражения с учетом сроков развития паразитов. Препарат, проявивший антигельминтную активность против одного вида гельминтов, проверяют против других видов паразитов у этого и других видов животных, т. е. выясняют спектр противопаразитарного действия.

При спонтанном заражении перед опытом выявляют инвазированных животных, определяют количество яиц/личинок гельминтов в г фекалий, нумеруют, взвешивают, распределяют их на группы с учетом массы тела, возраста, пола, породы и степени зараженности.

После введения препарата в течение 4 ч и затем ежедневно проводят наблюдения за клиническим состоянием животных с целью выявления возможного побочного действия. При назначении препарата с кормом отмечают поедаемость кормолекарственной смеси.

2. Сроки линьки личинок и развития патентной стадии нематод (сут)

Интерес представляет действие препарата на яйца гельминтов. Для этого, полученные из маток самок или проб фекалий от подопытных и контрольных животных, культивируют в физиологическом растворе при температуре 25-28 °С и следят за развитием личинок в яйцах. По наличию или отсутствию развития делают заключение об овоцидности используемого антигельминтика.

Дозы заражения и сроки учета эффективности антигельминтиков на овцах, свиньях, лошадях, плотоядных и птице представлены в таблице 11.3. Доза заражения овец D. filaria составляет 1000-1500 личинок, F. hepatica - 100 адолескариев, Paramphisto- mum spp. - 800-20000 метацеркариев на животное. Испытание препаратов при мониезиозе и дикроцелиозе проводят, как правило, на спонтанно инвазированных овцах. Убой животных и учет эффективности против взрослых гельминтов осуществляют при диктиокаулезе через 4-7 сут после введения препаратов, при фасциолезе - 14-21, дикроцелиозе - 14, парамфистомозе - 7, мониезиозе - 12 сут. Против преимагинальных гельминтов эффективность устанавливают с учетом продолжительности препатент- ного периода.

3. Дозы заражения и сроки учета эффективности препаратов

'¦¦¦                                                         ~ТГ-              —              ГГ*              **              х

Примечание: - личинки, - метацеркарии, - адолескарии, - яйца.

Свиней заражают А suum, как правило, в дозе 600-800, Т. suis - 100-150 и Metastrongylus spp. - 2500-5000 инвазионных яиц. Убой свиней для учета эффективности антигельминтиков проводят через 7-10 сут после дегельминтизации. При эзофагостомозе препараты испытывают на спонтанно инвазированных свиньях.

Испытание препаратов на плотоядных проводят при спонтанной токсокарозной инвазии, а также при экспериментальном эхинококкозе.

Эффективность на лошадях учитывают при спонтанной инвазии, вызванной jP. equorum, О. Anoplocephala spp., продолжительность препатентной стадии которых составляет соответственно 60-75; 21-28 и 30-45 сут.

Испытания препаратов на птице проводят, как правило, при экспериментальном аскаридозе, гетеракидозе, капилляриозе цыплят, гангулетеракидозе гусей и уток, спонтанном амидостомозе и дрепанидотениозе гусей и других гельминтозах. Цыплят заражают^. galli и G. gallinarum в дозе 300 яиц на голову, C. obsignata

• 100-120 инвазионных яиц. Гусей заражают G. dispar в дозе 400-500 инвазионных яиц. При амидостомозе препараты испытывают на спонтанно инвазированных гусях.

Особый интерес представляет выяснение персистентности действия антигельминтиков против разных видов гельминтов. Схема опыта по определению персистентности действия антигельминтиков представлена в таблице 11.4. В опыт по типу «контрольный тест» подбирается 7 групп животных по 6 голов в каждой, из них две группы служат в качестве леченого и нелеченого контроля. С интервалом 7 сут животным шести групп вводят препарат в терапевтической дозе. Через 35 сут после начала опыта заражают животных, а спустя 58-60 сут проводят их убой и гельминтологическое вскрытие для учета эффективности.

В последние годы возникла проблема из-за недостаточной эффективности антигельминтиков в связи с развитием у гельминтов устойчивости к их действию. Резистентность гельминтов к препаратам определяют в опыте «контрольный тест» на 6 группах животных по 5-6 голов в каждой. Сравнивают эффективность испытуемого и коммерческого препаратов против резистентных и чувствительных штаммов нематод при наличии контрольных групп.

После установления терапевтической дозы препарата проводят опыт по подтверждению этой дозы на 3-х группах спонтанно инвазированных животных при наличии контрольной. Назначают его животным в ранее установленной терапевтической дозе и в 2 раза увеличенной. Эффективность против разных стадий гельминтов определяют на основании копроовоскопических исследований и гельминтологических вскрытий 2-3-х животных из группы.

Клинические опыты проводят в полевых условиях с целью выяснения безопасности применения препарата для здоровья и продуктивности животных.