ЭПИДЕМИЧЕСКАЯ ДИАРЕЯ ПОРОСЯТ

Эпидемическая диарея поросят (ЭДП) впервые зарегистрирована в 1971 г. в Великобритании. Клинически болезнь проявляется аналогично ТГС, за исключением важного отличия, заключающегося в том, что поросята-сосуны (до 4-5 нед возраста) не заболевают.

Только в 1978 г. удалось установить связь коронаподобного вирусного АГ со вспышкой ЭДП типа 2 (27, 28).

Экспериментальное заражение подтвердило энтеропатогенность изолята, но только не для поросят-сосунов (8), а для свиней на откорме. Недавно показано, что вспышки ЭДП типа 1 и 2 обусловлены одним и тем же вирусом (28).

В ELISA-блокинг АТ к вирусу ЭДП обнаружены среди свинопоголовья Бельгии, Англии, Германии, Франции, Нидерландов, Швейцарии, Болгарии (12, 18). В США, по крайней мере до 1990 г., обнаружить АТ к вирусу ЭДП не удалось, как и в Австрии (26). Получены данные, свидетельствующие о возможности распространения инфекции, обусловленной вирусом ЭДП в хозяйствах стран СНГ. При исследовании на наличие вирусов ИГС и ЭДП в одних и тех же образцах патматериала положительные результаты получены в большинстве случаев как на ИГС, так и на ЭДП. Эго ставит вопрос о широком распространении смешанной вирусной инфекции ИГС-ЭДП. Возникает необходимость полномасштабных исследований по изучению этиологической роли вируса ЭДП при массовых вспышках острых диа- рейных заболеваний новорожденных поросят и молодняка, особенно в случаях когда болеют также откормочные и взрослые свиньи (1,2).

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Главным и часто единственным признаком ЭДП является водянистый понос. При вспышках заболевания на чувствительном поголовье заболеваемость и смертность могут значительно варьировать. Болезнь клинически очень похожа на ТГС, за исключением медленного распространения и невысокой смертности новорожденных поросят. Поросята до 1 нед возраста могут погибать от дегидратации при диарее в течение 3-4 дн. Смертность в среднем составляет 50%, но может достигать 90%. Животные более старшего возраста выздоравливают через 1 нед. На некоторых фермах, однако, тяжело поражаются поросята на откорме и даже взрослые свиньи, тогда как поросята-сосуны не поражаются вовсе, или у них развивается легкая диарея. Заболеваемость у новорожденных поросят низкая. Нет объяснения различию клинического проявления заболевания при отсутствии иммунитета. На откормочных фермах наблюдаются большие различия клинических признаков при острой вспышке ЭДП. У всех поросят выражена диарея в течение недели. Животные угнетены, аппетит отсутствует, кал водянистый (но без крови). Выздоровление наступало через 7-10 дн. Смертность - 1- 3%. Поросята погибают обычно на ранней стадии диареи или даже перед ее появлением. Самая высокая смертность обычно наблюдалась при стрессах.

ЭДП тяжелее болеет откармливаемое поголовье, чем на новорожденные поросята. Откармливаемые поросята более чувствительны к вирусу и заболеваемость достигает 100%. Распространение ЭДП в помещении закрытых племенных ферм, а также в откармливаемых стадах более медленно, чем ТГС. В племенных фермах на это уходит, как правило, 4-5 нед после заражения животных различных возрастных групп.

Макроскопические поражения локализуются в тонком кишечнике, который заполнен желтой жидкостью (25,29). Микроскопически через 24 ч после заражения заметны вакуолизация клеток эпителия и выход гистеоцитов в ворсинках тонкого кишечника, что соответствует последующей диарее. С этого момента укорачиваются ворсинки (13). Ультраструкгур- ные изменения находят только в цитоплазме энтероцитов (22), в которых клеточные органе- лы уменьшены, имеют электронно-ответные зоны.

Патогенез. Патогенез изучали на поросятах-гнотобиотах, не получавших молозива, инокулированных прототипным шт. СУ777 в возрасте 3-х дн (11). Поросята заболевали через 22-36 ч. Вирус репродуцировался в цитоплазме в эпителиальных клетках ворсинок в тонком и толстом кишечнике. Флюоресцирующие фокусы обнаружены также в криптах и мезентериальных лимфоузлах, но инфекция в этих зонах всегда оставалась рассеянной и, возможно, непродуктивной.

Заражение эпителиальных клеток наблюдалось уже через 12-18 ч после инокуляции поросят и достигало максимума через 24-36 ч. Развивалась дегенерация клеток тонкого отдела кишечника, что приводило к укорачиванию ворсинок. Отношение длины ворсинок и глубины крипт от нормального 7:1 снижалось до 3:1. В эпителиальных клетках толстого отдела кишечника дегенерации не отличались. Флюоресценция в клетках отмечалась до 5-го дня после заражения поросят. Поражения в тонком кишечнике были очень похожи на таковые при ТГС. При ЭДП отмечался более продолжительный инкубационный период. Размножение вируса ЭДП вне клеток кишечника не происходило.

Патогенез ЭДП на поросятах более старшего возраста изучен также детально. Флюоресценция вирусспецифического АГ обнаруживалось в эпителиальных клетках ворсинок тонкого и толстого отделов кишечника откармливаемых поросят как после экспериментального, так и после естественного заражения. До сих пор не ясно, каким образом поражения толстого отдела кишечника усиливало клиническое проявление болезни. Нет также объяснения наличию внезапных мышечных некрозов, часто наблюдаемых как у молодняка, так и у взрослых свиней.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Морфологический и химический состав. Морфология вируса ЭДП - типична для коронавирусов. Частицы, обнаруживаемые в фекальных массах, плеоморфны, чаще сферические. Их диаметр составляет 130 нм ( от 95 до 190 нм). Многие частицы имеют электронноплотную центральную зону размером 18-23 нм. Внутренние структуры не просматриваются. Морфогенез вируса ЭДП происходит в эпителиальных клетках кишечника по схеме, аналогичной другим коронавирусам. Собранные вирусные частицы могут проходить через цитоплазматические мембраны (14,15,16).

Физико-химическая и биологическая характеристики подтверждают принадлежность вируса ЭДП к семейству коронавирусов. Вирус эфиро- и хлороформочувствителен. Плавучая плотность составляет 1,18 г/см3. Концентрированный и очищенный вирус агглютинирует эритроциты 12 видов животных (5, 6, 7). Адаптированный к культуре клеток вирус ЭДП теряет инфекционность при 60°С в течение 30 мин, но значительно стабильнее при 50°С. Вирус стабилен при pH 5-9 при 4°С и 6,5-7,5 при 37°С. Инфекционность вируса не снижается при обработке ультразвуком или многократным замораживанием-оттаиванием.

Репликация не ингибируется 5-йод-2-дезоксиуридином, что показывает принадлежность вируса к РНК-содержащим (17,19, 20, 21). Основные структурные белки вируса ЭДП такие же, как и у других коронавирусов. Вирус содержит гликозшгарованный пепломерный протеин мол.м.85-135 кД, гликозшшрованный оболочечный протеин 20-32 кД, негаикозилиро- ванный РНК-связанный нуклеокапсидный протеин мол. м. 58 кД. Идентифицирован мембранный гликопротеин (М) вируса с использованием кроличьей антипептидной сыворотки, клонированного М-гена в клетках Vero и в бакуловирусной системе. Нативный М-белок вируса включается в вирионы, является N-гликозшшрованным и мигрирует с относительной подвижностью 27 К в полиакриламидном геле. М-белок, синтезированный рекомбинантным бакуловирусом, мигрирует с подвижностью 23К, т.е. идентично подвижности дегликозили- рованного продукта. Показано, что 19К полоса, определяемая в клетках, инфицированных вирусом ЭДП, но не в вирионах, представлена фрагментом М, из которого С-конец был удален. Ориентация М внутри оболочки вириона определялась также электронной микроскопией и с помощью иммунозолотой метки. Все данные подтверждают гипотезу о том, что вирус ЭДП должен быть отнесен к группе 1 коронавирусов (33).

Антигенная вариабельность и родство. В прямой ИФ или ЭМ установлено отличие вируса ЭДП от ТГС и ГВЭС, коронавируса собак, вируса диареи неонатальных телят, вирусов ИБ, ИПК (27). Однако исследования, проведенные с помощью более чувствительных методов (иммуноблоттинг), показали, что вирус ЭДП имеет АГ-детерминанты, общие с вирусом ИПК.

Культивирование Высокоочищенный вирус получают после орального заражения по- росят-гнотобиотов несколькими серийными промываниями тонкого кишечника, начиная с первых признаков диареи. Эта перфузия может продолжаться 12 ч, объем вирусного материала достигает 1,5 л с титром 104-105 ИД (для поросенка) в 1 мл (8, 9, 10). Адаптация вируса ЭДП к лабораторным моделям требует исключительных условий. Попытки культивирования различных изолятов ЭДП в кишечных или легочных эксплантатах плодов поросят или новорожденных поросят оказались безуспешными. Непостоянная репродукция вируса отмечалась в ряде культур клеток, как обработанных, так и необработанных трипсином или панкреатином (5, 17а, 35, 36). Однако линия Уего оказалась способной поддерживать серийное пассирование вируса. Рост вируса зависел от наличия трипсина в культуральной среде. ЦПД проявляется вакуолизацией и формированием синцитиев. Синцитий может содержать до 100 ядер. Кинетика роста характеризуется пиком титра вируса (105,5 БОЕ/мл) через 15 ч после заражения (18-21).

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Вирус ЭДП передается, главным образом, с калом больных животных. Заражение в естественных условиях происходит орально. Орально-фекальный путь передачи инфекции главный, если не единственный.

Вспышки ЭДП на ферме часто встречаются в течение 4-5 дн после продажи или покупки поросят. Заражение возможно через контаминированный транспорт, обувь или другие контаминированные вирусом предметы. После вспышки на ферме вирус может исчезнуть или заболевание принимает энзоотическую форму.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз нельзя поставить на основании только клинических признаков. Острая вспышка ЭДП, при которой диарея наблюдается среди животных всех возрастов, включая новорожденных поросят, клинически не дифференцирована от ТГС. Острая диарея поросят- отъемышей и более старших поросят на родительских фермах с клиническими признаками или очень легкими клиническими признаками у новорожденных поросят указывает на возможность ЭДП. Если диарея имеет место постоянно на взрослых животных, необходимо исключить эшерихиоз и ротавирусную инфекцию свиней. Вирус ЭДП или вирусный АГ обнаруживается в ЭМ и ИФА, чувствительность которой выше (4, 6). В ИФА вирусный АГ обнаруживался уже на 7-й день после заражения в пробах кала.

Специфические АТ выявлены в сыворотке крови как экспериментально, так и после естественного заражения вирусом ЭДП. Их обнаруживали в ИЭМ, ИФА, ИФА-блокинге, ИФ, подавлении ИФ и PH на поросятах или в культуре клеток линии Уего (6, 20, 21, 27, 30, 31, 32,

35). В ИФА АТ к пепломерному белку обнаруживаются легче, чем АТ к нуклеокапсид- ному протеину (23).

Индикация вируса. Лабораторные исследования позволяют поставить этиологический диагноз обнаружением вируса ЭДП или его АГ, или вирусспецифических АТ. Прямой метод ИФ криосрезов тонкого кишечника поросят наиболее чувствительный и приемлемый метод диагностики. Он может быть использован при получении материала от поросят, убитых только при острой диарее примерно через 48 ч после ее начала. При исследовании материала от павших животных метод малоэффективен (5). Вирусные частицы могут выявляться в кале при прямой электронной микроскопии. Наибольший процент (73) положительных проб кала получают при экспериментальном заражении поросят при сборе проб в первые часы после проявления диареи. ИЭМ используется для дифференциации вирусов ИГС и ЭДП, поскольку морфологически они очень похожи. Чувствительным и приемлемым методом диагностики ЭДП у взрослых животных и поросят является ИФА кала или кишечного содержимого. Этот тест более чувствителен, чем ЭМ. Материал собирают от нескольких животных с острой диареей. У экспериментально инфицированных поросят вирусспецифический АГ (ВСА) постоянно обнаруживают на 2-5-й день и непостоянно на 6-8-й день (6).

Выделение вируса. Выделение вируса из тонкого кишечника поросят в культуре клеток Уего удается только в присутствии в поддерживающей среде 10 мкг/мл трипсина. ЦПИ проявляются в виде слияния клеток и образования синцития. Вирусспецифический АГ в цитоплазме выявляется методом непрямой ИФ. После ряда пассажей в клетках Уего в присутствии трипсина вирус удавалось адаптировать к культурам клеток МА 104, СРК и ЕБК. Однако попытки адаптировать вирус к 6 типам первичных эмбриональных культур клеток свиньи не увенчались успехом. Вирус отличается по АГ-свойствам от вируса ТГС и энцефаломиелита свиней (24). Цитопатогенные шт. вируса ЭДП могут быть изолированы на культуре клеток линии Vero, ио диагностическое значение вирусовыделения не определено (19).

Серологическая диагностика. С этой целью используют несколько методов: непрямой ИФ, метод подавления ИФ в криосрезах, ИФА и подавление ИФА (ELISA-блокииг). Во всех этих методах используются парные сыворотки крови. Повторные пробы (реконвалесцентные пробы) сыворотки получают через 4 нед после начала диареи, поскольку при экспериментальном заражении АТ обнаруживаются не ранее, чем через 15 дн (21,30,35).

АТ, выявляемые в сыворотке методами ELISA-блокинг и ИФ-блокинг, персистируют в течение 1 года. Реинфекция кишечника с развитием диареи у серопозитивных животных, переболевших после первичной инфекции, возможна через 5 мес. Однако в этом случае наблюдается быстрая бустер-реакция (9,35).

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Специфические средства и методы профилактики ЭДП в настоящее время не разработаны. Искусственное распространение вируса ЭДП среди взрослых свиноматок, возможно, стимулирует лактогенный иммунитет и укорачивает сроки переболевания на ферме. Санитарные меры предупреждают занос вируса ЭДП на ферму. Эпизоотологические исследования показали, что вирус ЭДП заносится на ферму главным образом (или только) с перемещающимися людьми или животными.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1.Краснобаев Е.А. Тез. докл. н-пр конф ВНИИЗЖ, 1995 -.44. 2.Краснобаев Е.А. и др. Тез. н-пр. конф ВНИИЗЖ, 1995 :200. З.Сюрин В.Н. и др. Части вет вирусология. М, Колос, 1979. 4.Bollwahn W. Pig News Inf, 1983, 4 :141. 5,Callebaut P. et.al. Proc.5lh Int Cong Virol, Strasbourg,1981 .420. 6.Callebaut P. et.al. Vet. Microbiol, 1982, 7 :295. 7. Callebaut P. et.al. Proc 9th Int Cong Pig Vet Soc, Barce Iona, 1986, :213. 8.DeBouck P. et.al. Am J Vet Res,1980, 41 :219. 9.DeBouck P. et.al. Proc 8th Int Cong Pig Vet Soc Ghent, 1984 :53. lO.DeBouck P. etal. Vet Microbiol, 1981, 6, :157. ll.DeBouck P. et.al. Curr Top Vet Med Anim Sci, 1981, 13 :59. 12.DeBouck P. et.al. Proc 7th bit Copng Pig Vet Soc Mexico City,1982 :53. 13.Ducatelle R. etal. Zentralbl Veterinarmed [B], 1981, 28 :483. 14.Ducatelle R. et.al. Acta Virol., 1981, 68 :35. 15.Ducatelle R. etal. Vet Path, 1982, 19 :46. 16.Ducatelle R et.al. Vet Pathol, 1982, 19 :57. 17.

Egbering H.I. etal. Am J Vet Res, 1988, 49 :1320. 17a.Hess R.G. etal. Virus Berl Muench Tieraerztl Wochensch, 1980, 93 :445. 18.Hofmann N et.al. Schweiz Arch Tierhailkd, 1987, 129 :437. 19.Hofmann N. etal. J Clin Microbiol, 1988, 26 :2235. 20.HofmannN. et.al. Vet Microbiol, 1989, 20 :131. H.HofmannN. et.al. Vet Microbiol, 1990, 21 :263 . 22.Horvath L. et.al. Arch Virol, 1981, 68 .103. 23.Knuchel M. et.al. Proc 11л Int Congr Pig Vet,Lausanne,1990 :214. 24.Kusanagi K. etal. J Vet Med Sci, 1992, 54, 2 :313. 25.

Leopoldt D. etal Monatch Veterinaermed, 1981, 36 :411. 26.Mostl K. et.al. Wien Tieraerztl Monatsschr, 1990, 77 :10. 27.Pensaert M.B. et.al. Arch Virol, 1981, 68 :45. 28.Pensaet M.B. et.al. Proc 7th Int Congr Pig Vet Soc,Mexico City, 1982 :52. 29.Pospeschil A. et.al. Zentralbl Veterinaermed [B], 1981, 28 :564. 30.Prager D. etal. Tieraerztl Urnsch, 1981, 36 :404. 31.Prager D. etal. Tieraerztl Umsch, 1981, 36 -All. 32.Prager D. etal. Tieraerztl Urnsch, 1983, 38 :155. 33.Utiger A. etal. Virus Genes, 1995, 10, 2 :137. 34.Vannier P. et.al. Rec Med Vet, 1983, 159 :19. 35.Witte K.H. et.al. Tieraerztl Umsch, 1987, 42,:817. 36.Witte К. H. etal. Tier Umsch, 1981, 36 :235. 37.YalingZ. et.al. Arch Virol, 1988,102 :63.