БОЛЕЗНЬ ТЕШЕНА

Болезнь Тешена - вирусная болезнь свиней, характеризующаяся развитием негнойного энцефаломиелита и появлением параличей.

Болезнь Тешена впервые диагностировал Трефни (1930, 1931) в Чехословакии, в округе Тешен. Основательно её изучил Клобук (1931, 1933). Инфекция быстро распространилась в Чехословакии, проникла в Германию (1940), Австралию (1939), Югославию и Венгрию (1945). В настоящее время она встречается в Польше, Болгарии, Франции, Италии. Обнаружение антител к вирусам группы болезни Тешена - Тал фана в сыворотках крови свиней свидетельствует о широком распространении этих вирусов. В СНГ болезнь впервые была установлена в хозяйствах Закарпатской области (1,3,16).

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Инкубационный период продолжается 1-4 нед. В продромальном периоде, редко превышающем 72 ч, отмечают невысокую температуру, потерю аппетита, иногда рвоту, острый ринит, расстройство координации движения. Часто эти нарушения остаются незамеченными. Затем появляются клинические признаки поражения ЦНС. При энцефаломиелите наблюдают гиперстезию кожи, судорожные сокращения различных групп мышц, непроизвольные движения, регидность мышц конечностей, нистагм и т.

шатающаяся напряжённая походка, слабость конечностей, неполное их опирание на землю, прогрессирующий паралич, постепенно захватывающий конечности, шею и голову. Из- за паралича глотки отмечают частичную или полную утрату голоса. В тяжёлых случаях болезнь обычно заканчивается комой и гибелью животных. При более лёгком течении отмечают затруднённую походку, развитие полупараличей и параличей без явлений возбуждения. Животные, в основном, заражаются алиментарно. Затем вирус репродуцируется в эпи- телиоцитах слизистой оболочки толстого кишечника, а оттуда проникает в лимфоузлы, кровяное русло и разносится по всему организму, в том числе попадает в ЦНС. Клинически болезнь протекает с явлениями острого энцефаломиелита и менингита, наиболее выражена депрессия, повышенная кожная чувствительность, спастическое состояние губных, глазных и жевательных мышц, а также мышц конечностей, сопровождающееся плавательными движениями; часто наблюдают рвоту, афонию, хрипоту, косоглазие, скрежетание зубами, затрудненное жесткое дыхание. После наступления стадии паралича температура тела снижается до нормальной и перед смертью достигает 32-34 °С (Рис. 72, 144).

Существенные патологоанатомические изменения находят только в ЦНС. Они характеризуются гиперемией мозговых оболочек и серозной инфильтрацией. На срезах мозга в различных местах отмечают кровоизлияния, периваскулярную круглоклеточную инфильтрацию с образованием очагов нейронофагии, причём поражается лишь серое вещество мозга. В мозжечке изменения обнаруживают в клетках Пуркинье. Наиболее характерные изменения находят в ганглиозных клетках. Поражаются моторные центры вентральных рогов (“разжижение” ядер клеток, образование вакуолей, наличие кариорексиса). Значительная нейронофагия преобладает в вентральных рогах поясничной области спинного мозга. Диагностическую ценность представляют гистологические изменения. Они наиболее выражены в средней и каудальной частях головного мозга (особенно на его основании - ножках мозга и четверохолмии), а также в шейной и поясничной частях спинного мозга.

При патологоанатомическом исследовании наблюдают гиперемию мягких оболочек, явления отека серого вещества (преимущественно ромбовидного и среднего мозга), шейного и поясничного утолщений спинного мозга, катаральный ринит, бронхит и отек легких, точечные и пятнистые кровоизлияния под эпи- и эндокардом. Желудок обычно наполнен кормовыми массами, слизистые его и толстого отдела кишечника складчатые, очагово гиперемированы и покрыты густой прозрачной слизью. Мочевой пузырь всегда переполнен.

При микроскопическом исследовании ЦНС всегда определяют негнойный, лимфоцитарного типа полиэнцефаломиелит и менингит. При исследовании животных, павших в первые дни болезни, в сером веществе головного и спинного мозга наблюдают разные по величине очаговые и диффузные клеточные инфильтраты из глиальных элементов, гистиоцитов и лимфоцитов. Среди клеток инфильтрата иногда обнаруживают небольшие скопления эритроцитов. Полиморфноядерные и нейтрофильные лейкоциты встречаются редко и только у животных, павших (или убитых) в первые часы и дни клинического проявления болезни. Многие клетки инфильтрата находятся в состоянии пикноза и рексиса. В очагах поражения очень часто регистрируют дезинтеграцию нервной ткани, дистрофические и некробиотиче- ские изменения нервных элементов, распад и исчезновение фосфолипидов. По периферии диффузных и крупнофокусных поражений паренхимы.отмечают активизацию микроглии, местами - мелкоочаговые скопления мононуклеарных клеток.

Электронно-микроскопическим исследованием в клетках инфильтрата установили набухание и дезинтеграцию канальцев гладкой эндоплазматической сети, образование большого количества пузырьков и вакуолей, набухание митохондрий с разным числом фрагментированных крист. При более длительном течении болезни в инфильтратах появляются плазматические клетки, зернистые шары, идет разрастание астроцитарной глии. Для сосудистых нарушений в начале болезни характерно расширение и переполнение капилляров, мелких вен и артерий ( эндотелий их набухший с признаками пролиферации).

Установили изменения в эндоплазматической сети, митохондриях и других ультраструктурах. В некоторых нервных клетках набухание митохондрий и фрагментация их крист были настолько выражены, что они принимали вид крупных прозрачных вакуолей. В отдельных нейронах, кроме того, часто наблюдали значительный рост числа первичных и вторичных лизосом. Нарушение внутриклеточных мембранных систем коррелировало с наличием в цитоплазме клеток большого количества вирусных частиц: единичные вирионы (или их небольшие скопления) обнаруживали в перинуклеарном пространстве или в местах его перехода в канальцы гладкой эндоплазматической сети (отдельные вирусные частицы находились внутри пузырьков и вакуолей). В части нейронов отмечали гипертрофию и гиперплазию комплекса Гольджи с вакуолизацией цистерн. В нервных волокнах выявляли набухание, аргентофилию и варикозные утолщения аксонов, местами - фрагментацию и глыб- чатый распад. На 5-7 сут болезни часто встречали дезинтеграцию миелиновых волокон с явлениями демиелинизации.

При выздоровлении животных в очагах поражения ЦНС были выражены восстановительные процессы, менялся состав инфильтрата, количество клеток в нем постепенно уменьшалось, появлялись макрофаги и зернистые шары.

Патогенез. Первичная репродукция вируса отмечается в заглоточных лимфоузлах и кишечнике (11). Во время болезни отмечают лейкоцитоз, резко меняется количество клеток в ликворе; уже на 2-е сут оно возрастает до 44 (при норме 10-12); на 3-и до 247-395 в 109/л (р<0,001); причем преобладают полиморфные ядерные нейтрофильные лейкоциты и лимфоциты. В 3-4 раза возрастает содержание общего белка спинномозговой жидкости, органического фосфора - в 2-3 раза, что свидетельствует об интенсивной воспалительной реакции в мозговом веществе и оболочках.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Впервые вирус болезни Тешена выделил Трефни (1930) в Чехословакии в округе Тешен.

Морфология и химический состав. Вирионы сферической формы, диаметр их 25-30 нм. Вирионы безоболочечиые, с плавучей плотностью в CsCl 1,34 г/ см3, содержат ядро из 1-нитчатой РНК, окруженное кубическим капсидом (Рис. 69, 70). Липопротеины отсутствуют и вирус устойчив к жирорастворителям.

Устойчивость. Вирус устойчив к эфиру, хлороформу и трипсину, не изменяется в широком диапазоне pH (2,8-9,5). При pH 11,8 инфекционность его быстро снижается на 50%. Трипсин в концентрации 125-1250 мкг/мл повышает вирулентность вируса болезни Тешена в 10 раз и способствует его реактивации после тепловой (при 37 и 56°С) обработки. Вирус выдерживает нагревание при 60°С в течение 15 мин, но инактивируется за 20 мин. При нагревании до 70°С теряет активность через 10 минут. После частичной очистки протамин- сульфатом инактивируется при 50°С за 20 мин. При 37°С вирус может переживать до 17 дней, но быстро гибнет при развитии гнилостных процессов. Поэтому вируссодержащие материалы следует сразу же консервировать глицерином или р-ром Хенкса с антибиотиками и ставить в термос со льдом.

Антигенная активность. В крови больных и переболевших животных появляются специфические ВНА и КСА.

Антигенная вариабельность и родство. В PH и РСК показано антигенное родство между вирусами болезни Тешеиа и болезни Талфана. В иммунологическом отношении вирусы болезни Тешена являются единым типом, внутри которого различают два подтипа: в первый входят шт. Bozen, Konratice, Repo-ryie, во второй - шт. Tyrol, Sweden Ug, Talfan.

ГА свойства не установлены.

Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. В крови и в органах вирус обнаруживается кратковременно и в небольшом количестве. Виремию в течение 48 ч отмечают между 4-6 днями после заражения, титры вируса в крови обычно бывают невысокими. В организме свиней вирус локализуется и размножается в тканях ЖКТ, в которых он появляется через 24-72 ч после заражения и обнаруживается в течение 5-7 нед. Наивысшие титры вируса (106 ТЦД^/г) в пробах фекалий обнаруживают через 9 дн после заражения. В миндалинах, мезентериальных и брыжеечных лимфоузлах вирус появляется через 48 ч после заражения и выявляется в течение 6-8 дн. В головном и спинном мозге он выявляется после виремии. В максимальных титрах ( 105,5 - 10 6,6 ТЦД 50/г он содержится там еще до проявления признаков болезни и в течение первых дней паралитической стадии. В наиболее высоких концентрациях вирус содержится в шейном и грудном отделах спинного мозга и в мозжечке, что делает эти ткани наиболее пригодным материалом для выделения вируса. К 5-

му дню после появления симптомов болезни содержание вируса в тканях ЦНС снижается, и к моменту гибели животного можно наблюдать так называемую аутостерилизацию. Менее регулярно вирус обнаруживают в секретах и экскретах (носовые истечения), иногда - в кале.

Вирус выделяется во внешнюю среду, главным образом, в продромальной стадии и в первые 2 дня болезни.

Экспериментальная инфекция. К экспериментальному заражению восприимчивы поросята до 1-2 мес возраста. Поросята 2-нед возраста, не получающие молозиво, переболе- вают тяжелее, чем поросята 3-нед возраста. Иногда болезнь удается воспроизвести только у поросят-сосунов 3-5- дн. возраста, не получающих молозива. Экспериментальная инфекция легче удается при интрацеребральном илн субдуральном введении вируссодержащего материала. Менее эффективно интраназальное или оральное заражение. Иногда практикуют ин- трацеребральное и интраназальное заражение. Лабораторные животные к вирусу болезни Тешена - Талфана и возбудителям других полиэнцефаломиелитов свиней нечувствительны. У экспериментально инфицированных беременных морских свинок отмечались поражения плаценты (10). Предполагается, что в беременную матку вирус также проникает при виремии, поскольку показано инфицирование эмбрионов после орального или интраназального инфицирования свиноматок (7). Даже при парентеральном инфицировании поросят энтеровирусом он очень быстро обнаруживается в кишечнике. При этом заболевание быстро проходит, тогда как вирус персистирует в толстом кишечнике несколько недель (5).

Культивирование. Вирус размножается в культурах клеток почек, легкого, сердца, семенников, яичников и др. поросят 3-8 нед возраста и эмбрионов свиньи. Размножение сопровождается образованием бляшек. ЦПИ, не отличаются от изменений, вызываемых другими энтеровирусами свиней (Рис. 71). Они характеризуются скоплением округлившихся клеток с повышенной рефрактильностью, которые становятся заметными на 3-5-й день после заражения. При использовании адаптированных “культуральных” штаммов вируса первые признаки ЦПД появляются значительно раньше (иногда уже через 2-16 ч). Пораженные клетки отделяются от поверхности стекла; помимо очагов дегенерации, появляются участки, лишенные клеток. При исследовании окрашенных препаратов инфицированной культуры обнаруживают зернистость и ацидофилию протоплазмы, конденсацию хроматина и эксцентричное положение ядра. Развитие ЦПИ соответствует нарастанию титра вируса. При работе с адаптированными штаммами вновь образованный вирус появляется в культуре между 9 и 12 ч после инокуляции. Максимальные титры его (10 7,5-10 8 ТЦД so/мл) обычно бывают прн дегенерации монослоя на 75% (+++), что чаще всего происходит в период между 18 и 24 ч после заражения. К моменту полного разрушения монослоя титр вируса начинает снижаться. На КЭ вирус болезни Тешена и возбудители тешеноподобных заболеваний не размножаются.

Размножение энтеровирусов свиней (вируса болезни Тешена - Тальфана) удается в перевиваемых линиях клеток почек (IBRS-2) и других органов (SST). Некоторые штаммы репродуцируются в клетках HeLa, ВНК-21. Различные штаммы вызывают 1 из 3 видов ЦПД в культуре клеток почек поросят и по характеристике ЦПД в клетках ВНК-21, HeLa и Vero штаммы относят к одной из 4-х групп (9).

ЭПИЗООТОЛОГИЯЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Источником инфекции служат больные животные. Чаще заражение происходит при потреблении корма, воды, мясных отходов или бо- енских отбросов, загрязненных выделениями больных животных, а также помоев. Возможно и контактное заражение. Инфекцию могут распространять свиньи-реконвалесценты или животные, переболевающие бессимптомно. Воротами инфекции служит, по-видимому, обонятельная область слизистой оболочки носовой полости.

Спектр патогенности в естественных условиях. Восприимчивы только свиньи. Болезнь встречается также в Европе у диких свиней, на Мадагаскаре у водяных свиней (Potamochoerus larvatus). Наиболее восприимчивы поросята-отъемыши и подсвинки.

ДИАГНОСТИКА Для выделения вируса из ЦНС необходимо отбирать пробы тканей от свиней с нервным синдромом на ранней стадии его проявления. У животных с признаками параличей уже через несколько дней вирус не обнаруживается в ЦНС (13). Вирус может быть выделен в культурах клеток из спинного мозга, коры головного мозга или мозжечка. Идентификацию вируса проводят на основе физико-химических характеристик, ИФ или ИФА (15). Для выявления АТ широко используется ELISA (8).

При дифференциальной диагностике следует исключить БА, бешенство, КЧС, отравления хлоридами и соланином. Диагноз на прошедшую инфекцию, а также латентное вирусо- носительство ставят на основании определения титров АТ в сыворотках крови реконвалесцентов в PH в культуре клеток почки свиньи с использованием лабораторных штаммов вирусов болезни Тешена, Талфана и Т-80.

Для ускоренной диагностики болезни, а также выявления концентрации вируса в органах и тканях используют ИФ (2). В первые 3 дня болезни наблюдают специфическое свечение цитоплазмы нейронов всех исследованных отделов ЦНС, клеток межпозвоночных узлов, отдельных клеточных элементов селезенки, мезентериальных лимфоузлов, слизистой толстого кишечника. Но начиная с 4 сут свечение в нервных элементах и других тканях резко снижается, а на 5-7-е сут энтеровирусный АГ выявляют лишь в эпителии слизистой кишечника. Вот почему для диагностики энзоотического энцефаломиелита свиней кроме тканей ( мозжечок, продолговатый и спинной мозг), рекомендуемых инструкцией для ИФ, необходимо отбирать и кусочки слизистой ободочной кишки. При прижизненной диагностике и определения у животных вирусоносительства разработан и внедрен в производство прямой метод флюоресцирующих АТ в мазках - отпечатках со слизистой прямой кишки и фекалий. Положительную ИФ в мазках наблюдают в эпителиоцитах и их обломках в течение всей болезни, а у переболевших (вирусоносителей) - до 2 мес (2)

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Для специфической профилактики болезни Тешена используют ГОА формолвакцину, приготовленную из головного и спинного мозга зараженных поросят, и живую вакцину из культурального мутанта «Тюбинген», представляющего собой шт. Konratice вируса болезни Тешена, аттенуированного серийным пассированием в культуре клеток почки свиньи (3,4).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1.Романенко В.Ф. и др. Ветеринария 1982 :4. 2.Романенко В.Ф. и др. Ветеринария 1991, 7 :27. З.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол., Колос, 1979 :367. 4.Сергеев В.А. Карант. и малою, бол. жив., Колос, 1983. 5.Dermyshire J.B. In Dis of Swine. Ed Leman A.D. et.al., 1994, USA, Iowa Un.. 6.Derbyschire J.B. et.al. Agri Wastes 1986, 18, :309. 7.Huang J. et. al. Am J Vet Res, 1980, 41 :469. 8.Hubschle O.J.B. et.al. DTW 1983, 90 :86. 9.Knowles N.J. et.al. Arch Virol, 1979, 62 :201. lO.Lieu C.I. Taiwan J Vet Med Anim Husb 1976, 28 :1. ll.Long J.F. Crc Press Inc, 1985 :179. 12.Lund E. et.al. Agri Wasters 1983, 7 :221. 13.Lynch J.A. et.al. Can J Comp Med 1984, 48 :233. 14.Simon J. et.al. Int J Appl Radioisot, 34 :793. 15.Sulochana S. et.al. Kerala J Wet Sei, 1978, 9:111. 16.Thoren I. et.al. Suond J Infect Diseases, 1992, 24, 2 :137.