Метод экстракции липидов спиртово-эфирной смесью (по Блюру).  

Реактивы: смесь этилового эфира и диэтилового эфира (3 : 1); петролейный эфир.

Оборудование: пипетки на 1, 5 и 10 мл; колбочки с притертой пробкой на 50 и 100 мл; воронки; пробирки с притертой пробкой; бумажные фильтры; роторный испаритель; водяная баня; аналитические весы.

Ход определения.

Экстракт используют для определения главным образом холестерина и триацилглицеринов, поскольку фосфолипиды экстрагируются не полностью.

Клиническое значение. Физиологическая гипер- липемия отмечается через 1—3 ч после скармливания животным кормов, обогащенных липидами, а также у кур, индеек, уток, гусей и других птиц (самок) в период их полового созревания, подготовки к яйцекладке и в период интенсивной продуктивности. Патологическая гиперлипемия наблюдается у коров с патологией обмена веществ и алиментарным бесплодием, при концентратом типе кормления, ожирении, остром и хроническом гепатите, хроническом нефрите, гипофункции щитовидной железы, передней ДОЛИ гипофиза, недостаточной активности сывороточной липопротеиновой липазы (ЛПЛ), расщепляющей триацилглицерины сыворотки крови (фактор просветления).

Концентрация общих липидов в сыворотке крови в норме составляет у крупного рогатого скота 280—600 мг/100 мл, у свиней — 350—400, кур 360—2100 мг/100 мл.

Источник: 57.

Определение общих липидов в сыворотке крови с сульфофосфова- нилиновым реактивом (по Цёлнеру—Киршу в изложении Л.

Реактивы: серная кислота (Н3804) концентрированная (х. ч.) или для пробы Соваля;

ортофосфорная кислота (Н3Р04) концентрированная;

ванилин (х. ч.), 0,6%-ный раствор. 0,6 г ванилина растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды с нагреванием на водяной бане, после охлаждения доводят объем до 100 мл. Раствор стабилен при хранении при комнатной температуре;

фосфор-ванилиновый реактив. 4 части ортофофорной кислоты смешивают с 1 частью 0,6%-ного раствора ванилина. Хранят в темной склянке при комнатной температуре;

хлороформ (х. ч. или для наркоза);

стандартный раствор в хлороформе триолеина или холестерина (х. ч.) со свежим топленым и профильтрованным сливочным маслом в соотношении 1: 3 или общие липиды, выделенные из сыворотки крови или печени. Взвешивают на аналитических весах 1200 мг триолеина или других указанных липидов и растворяют в мерной колбе на 100 мл. Хранят в темной склянке с притертой пробкой в холодильнике.

Оборудование: ФЭК или спектрофотометр; водяная баня; термостат; колбы мерные; пипетки; пробирки.

Ход определения. В пробирки (высотой 15 см) с 0,01 мл сыворотки крови добавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и ставят в кипящую водяную баню или термостат при температуре 130 °С на 20 мин. Водяная баня должна быть заполнена водой не ниже уровня жидкости в пробирках, поставленных в нее. Используемые для анализа пробирки и другую посуду моют отдельно, тщательно ополаскивают дистиллированной водой и спиртом.

Через 1 ч определяют оптическую плотность на ФЭКе или спектрофотометре при зеленом фильтре (500—560 нм) в кювете с толщиной слоя 0,5—1 см против холостой пробы. Холостую пробу готовят так же, как и опытную, но вместо сыворотки берут 0,01 мл воды. Если концентрация липидов низкая и недостаточно улавливается на ФЭКе, то для исследования берут двойную дозу сыворотки (0,02 мл).

Расчет ведут по калибровочному графику. Для его построения из стандартного раствора триолеина готовят рабочие калибровочные растворы (табл. 20).

20. Приготовление рабочих растворов для построения калибровочного графика

Берут по 0,01 мл каждого разведения калибровочного раствора и выполняют все операции, как с опытными пробами (обязательно выдерживают в водяной бане точно так же, как и пробирки с исследуемой сывороткой).

На основании полученных данных строят калибровочный график.

Прямолинейная зависимость между концентрацией общих липидов и оптической плотностью сохраняется до 1200 мг%. Поэтому при большей концентрации сыворотку крови разводят физраствором и результаты умножают на разведение.

Для определения этим методом содержания общих липидов в тканях животных необходимо свежую или замороженную ткань подвергнуть деемолизу в 33%-ном растворе калия гидроксида* В пробирку помещают 200 или 300 мг ткани, прибавляют 3 мл 33%-ного калия гидроксида и выдерживают на кипящей водяной бане 60—120 мин, периодически встряхивая. Содержимое пробирок доводят дистиллированной водой до 5 мл и тщательно перемешивают. Из этого содержимого берут 0,2 мл в другую пробирку, приливают 1 мл серной кислоты и кипятят в бане или выдерживают в термостате при температуре 130 °С в течение 20 мин. После охлаждения приливают 2 мл сульфофосфованилиновой смеси и дальнейшие операции проводят так же, как описано выше с сывороткой крови. Однако в этом случае при исследовании на ФЭКе удобнее пользоваться кюветами с толщиной слоя 0,5 см. Сравнение определения концентрации общих липидов в известных стандартных растворах и в пробах, проводимое различными методами, показало высокую точность и воспроизводимость результатов.

Источник: 6, 29, 57.