ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИКВОРА  

Получают ликвор люмбальной, субокципитальной и постокци- питальной пункциями, которые проводят специальными иглами с мандреном. Для лабораторных исследований берут 5—15 мл ликвора; для подсчета клеток достаточно 0,5 мл. В ликвор, содержащий фибриноген, что бывает при менингите, добавляют антикоагулянт (ЭДТА). Операцию по получению ликвора проводят под наркозом с соблюдением правил асептики и антисептики.

Люмбальную пункцию проводят в месте между последним поясничным позвонком и передним краем крестцовой кости; у собак — между 5-м и 6-м или 6-м и 7-м позвонками.

Субокципитальную пункцию делают в месте крыловидного отверстия (в затылочной ямке) — между затылочной костью и атлантом (первый шейный позвонок).

Постокципитальную (цервикальную) пункцию делают между атлантом и вторым шейным позвонком (эпистрофеем); у собак — между наружным затылочным выступом и краниовентральной частью остистого отростка эпистрофея.

Физические свойства. Ликвор представляет собой прозрачную жидкость, похожую на воду. Относительная плотность его у здоровых животных 1,004—1,008 кг/л, она повышается при менингите, менингоэнцефалите, энцефаломиелите, злокачественной катаральной горячке, уремии и диабете.

Ц в е т.

Прозрачность. В норме спинномозговая жидкость прозрачная. Помутнение ликвора происходит при наличии в нем гноя, большого количества белка, лейкоцитов, микроорганизмов, фибриногена (воспаление головного и спинного мозга и их оболочек).

Биохимические и морфологические исследования. В ликворе можно определить содержание общего белка, глобулинов, глюкозы, электролитов, клеток крови и других показателей.

Определение белка. В качестве унифицированного используют метод с кислотой сульфосалициловой и натрия сульфатом.

Принцип. Кислота сульфосалициловая вызывает коагуляцию белков и помутнение ликвора, степень которого пропорциональна содержанию белков.

Реактивы: 6%-ный раствор кислоты сульфосалициловой;

14%-ный раствор безводного натрия сульфата. Для анализа применяют свежеприготовленный рабочий раствор: смесь равных объемов приведенных выше реактивов;

1%-ный стандартный раствор альбумина. 1 г лиофилизирован- ного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора натрия хлорида в мерной колбе на 100 мл и доводят объем этим же раствором до метки. Реактив нестойкий, для стабилизации к нему добавляют 1 мл 5%-ного раствора натрия азида (КаГgt;Юз).

Ход определения. В пробирку вносят 5 мл свежеприготовленного рабочего раствора и 0,5 мл ликвора, перемешивают. Через 10 мин интенсивность помутнения измеряют на ФЭКе в кювете с длиной оптического пути 1 см против холостой пробы (0,9%-ного раствора натрия хлорида). Длина волны 410—480 нм (сине-фиолетовый светофильтр). Расчет ведут по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика из калибровочного раствора готовят разведения и обрабатывают их как опытную пробу. В 5 пробирок вносят соответственно 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1 мл раствора альбумина и в каждую из них доливают до объема 10 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Концентрация белка в этих растворах составляет соответственно 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 и 1 г/л.

Примечания. 1. Если муть начинает оседать, то перед измерением интенсивности пробирку тщательно встряхивают. 2. Перед определением белка рекомендуется поставить качественную пробу Панди, и если результат реакции оценивается 3+ или 4+ (много белка), то ликвор разводят 0,9%-ным раствором натрия хлорида и при расчете учитывают степень разведения. 3. Прямолинейная зависимость калибровочной кривой сохраняется до 1 г/л. При более высокой концентрации белка в ликворе ее разводят 0,9%-ным раствором натрия хлорида.

Клиническое значение. Концентрация общего белка в ликворе повышается при нарушении гемодинамики, воспалительных процессах в головном и спинном мозге и их оболочках. В ликворе, также как в сыворотке крови, общий белок представлен альбуминами и глобулинами.

Определение глобулинов по реакции Панди. Принцип. Реакция основана на осаждении глобулинов насыщенным раствором карболовой кислоты.

Реактив: насыщенный раствор карболовой кислоты. 100 г карболовой кислоты растворяют в 1 л воды, встряхивают и помещают в термостате при 37 °С на 6—8 ч. Затем оставляют стоять

7. дней при комнатной температуре, надосадочную жидкость сливают и используют в качестве реактива.

Ход определения. На часовое стекло, помещенное на черную бумагу, наносят 1 мл реактива и по краю наслаивают 1—2 капли ликвора. В случае положительного результата в месте соприкосновения реактива с ликвором образуется молочно-белое облачко, переходящее в муть.

Результаты реакции Панди обозначают четырьмя плюсами: слабая опалесценция 1+, заметная опалесценция 2+, умеренное помутнение 3+, значительное помутнение 4+.

Микроскопия. Микроскопию ликвора проводят в целях определения количества лейкоцитов, эритроцитов, дифференцировки клеточных элементов. Подсчет клеток в камере проводят в течение 1 ч после получения ликвора.

Подсчет лейкоцитов. Принцип. Количество лейкоцитов подсчитывают в счетной камере после разрушения эритроцитов раствором уксусной кислоты.

Реактивы: 10%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовым фиолетовым: ледяной уксусной кислоты 5 мл, воды до 50 мл, метиленового фиолетового 0,1 мл.

Оборудование: микроскоп с осветителем; камера Фукса—Розенталя или с сеткой Горяева; смесители для подсчета лейкоцитов (меланжеры).

Ход определения. В меланжер набирают до метки I 10%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым фиолетовым; затем до метки II набирают ликвор. После встряхивания заполняют камеру Фукса—Розентеля содержимым меланжера, предварительно выпустив первую каплю. Камера Фукса—Розентеля состоит из 16 больших квадратов, каждый из которых разделен на 16 малых — всего 256 квадратов. Глубина камеры 0,2 мм, общий объем 3,2 мкл.

Лейкоциты считают во всех 256 квадратах и полученное число делят на 3,2 (объем камеры). Результат соответствует количеству форменных элементов в 1 мкл ликвора; кроме того, полученный результат делят на 10/11 (степень разведения ликвора). Таким образом, формула для пересчета выглядит так:

А-11 = А

2. 10 3’

где А — число форменных элементов в объеме 256 квадратов.

Для дифференциации лейкоцитов ликвор вначале центрифугируют, затем из осадка делает мазок, фиксируют и окрашивают.

Окраска по Розиной. Спинномозговую жидкость центрифугируют 7—10 мин. Надосадок сливают, осадок помещают на обезжиренное стекло, легким покачиванием распределяют его по поверхности стекла, через 1—2 мин стекло ставят в вертикальное положение, жидкость стекает. В зависимости от предполагаемого количества лейкоцитов осадок располагают на стекле на участке от 1 до

3. см2 и более. При очень большом количестве клеточных элементов и наличии крови осадок распределяют по всей поверхности предметного стекла и тотчас сливают. При этом достигается минимальная толщина мазка.

Мазки высушивают в сушильном шкафу при температуре 40—50 °С. Затем фиксируют метанолом 1—2 мин и красят по Романовскому: тонкий препарат с небольшим цитозом 6—7 мин, с большим цитозом и кровью 10—12 мин. Затем краску сливают, мазок промывают дистиллированной водой и высушивают. Если ядра имеют бледно-голубой цвет, мазок докрашивают еще

2. 3 мин. Готовый мазок просматривают под микроскопом.

Кроме лейкоцитов в ликворе обнаруживают плазматические клетки, макрофаги, нейтрофилы, эозинофилы, опухолевые клетки и др.

Клиническое значение. Количество лейкоцитов в спинномозговой жидкости здоровых животных не превышает 5—8 в

1. мкл. На лимфоциты приходится 60—80 %, на моноциты 20—40 %. Увеличение количества лейкоцитов (плеоцитоз) встречается при менингите, энцефалите, миелите, менингоэнцефалите различной этиологии. Резко повышается их содержание при опухолях ЦНС, хронических воспалительных процессах в оболочках мозга, а также в послеоперационном периоде.

Источники: 28, 31.

Для общего клинического анализа спинномозговой жидкости (определение белка с сульфасалициловой кислотой, глобулинов в реакции Панди, цитоза с реактивом Самсона) ООО «Борис-99» (Москва) производит и реализует набор реактивов.