ЯПОНСКИЙ ЭНЦЭФАЛИТ

Японский энцефалит (ЯЭ)(японский энцефалит В, русский осенний энце-фалит) - тяжело протекающая инфекционная болезнь людей, лошадей и других животных, проявляющаяся общими токсикоиифекционными явлениями и развитием менингиальных и общемозговых симптомов.

Распространение. ЯЭ распространён в Японии, на всей территории Юго-Восточной Азии и Юго-Восточной Индии. Вирус сохраняется в организме птиц, комаров и других животных. В 1978 г. в Индии (в штате Уттер-Прадеш) заболело 3451 человек, из них умерло 1093 (25). ЯЭ эндемичен в Тайланде и Индии. В 25% случаев ЯЭ приводит к летальному исходу. У 30% выздоравливающих имеет место нейропсихиатрические нарушения (23).

Клиническая картина и патологоанатомические изменения. Различны и неспецифичны. При экспериментальном заражении инкубационный период у лошадей продолжается от 4 до 15 дн. Болезнь протекает остро и характеризуется токсическими и нервными явлениями. Наблюдаются фибриллярные подрагивания мышц, иногда гиперкинезы, параличи. Возможны приступы сильного возбуждения. Больные впадают в коматозное состояние, наступает общий паралич и смерть. Болезнь длится 8-10 дн. Выраженные изменения отмечают в головном мозге. Селезёнка увеличена, с кровоизлияниями под капсулой. На слизистой мочевого пузыря мелкие кровоизлияния. У свиней вирус может вызывать аборты или рождение мёртвых плодов (1, 2). У супоросных свиноматок вирус ЯЭ вызывает аборты и другие репродуктивные нарушения; у хряков могут наблюдаться острые орхиты. У лошадей развиваются поражения ЦНС, подобные поражения также регистрируют у обезьян и ослов.

Патогенез. У инфицированных животных развивается виремия от 12 ч до нескольких дией, после чего вирус диссиминирует в печень, селезенку и мышцы. Дальнейшая репликация вируса в этих органах поддерживает виремию. Затем вирус проникает в ЦНС с цереброспинальной жидкостью, эпителиальными клетками, макрофагами или лимфоцитами.

7» 99 ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Впервые выделил вирус японский исследователь Хаяши в 1934г. В СССР его выделил и изучил Шубладзе (1940г.), Смородинцев и Неустроев (1941г.).

Морфология и химический состав. Средний диаметр вириона с оболочкой 40 нм (30). Форма гексагональная. Вирус содержит 1-цепочечную РНК. Полная нуклеотидная последовательность геномной РНК составляет 10976 нуклеотидов, соответствующих 3432 аминокислотным остаткам (30). Плотность в градиенте сахарозы 1,18 г/см3. В вирионах выявлены 3 структурных и несколько неструктурных белков. Структурные белки включают оболочечный гликопротеин Е (54 кД), негликозилированный оболочечный протеин М (8 кД) и капсидный протеин С (14 кД). Оболочечный протеин Е носитель эпитопов, ответственных за индукцию ВНА. По крайней мере 9 эпитопов установлено в протеина Е и один N-сайт ви- русспецифический (20). По данным других исследователей, в состав вируса входят 3 полипептида: ГП (мол.м. 25000 Д), НП (мол.м. 16000 Д) и МП (мол.м. 9800 Д). Выяснен аминокислотный состав белков V3 2-х шт. ВЯЭ: Nakayama-NJH и JaGAr-01 (32). Определена полная последовательность нуклеотидов его геномной РНК. Общая длина РНК его составляет 10976 нуклеотидов. На N-конце полипротеина локализуется белок С, далее белок М и Е. С- концевую часть полипротеина занимает неструктурный белок - РНК-зависимая РНК- полимераза (29). Методом олигонуклеотидного фингерпринта установлено, что имеют место мутации штаммов вируса, выделенных в разных зонах Японии и Тайланда (13). Подобно другим альфавирусам в геноме ВЯЭ одна открытая рамка считывания (26).

Устойчивость. Вирус разрушается при 56°С за 30 мин. Имеется стабильный вариант, выделенный клонированием в культуре ткани, у которого при 60°С сохраняется 65% исходной инфекционности. При 25°С менее устойчив, чем вирус ЗАЭЛ. Не устойчив при pH 10,0 и 7,0; pH 8,5 является оптимально стабилизирующим. При pH 3,0 инфекционный тигр снижается. Разрушается эфиром и дезоксихолатом; в лиофилизированном виде сохраняется не менее 10 лет, при -70°С - не менее года без снижения титра, при -20° - ие менее года со значительным снижением титра. При -76°С вирулентность вируса сохраняется до 8 лет.

Антигенная структура. Вирионы содержат 2 КС АГ мол.м. 5 8• 103 Д и 24-103 Д - гли- козилированный полипептид V-3. Имеются как связанные с вирусной частицей, так и растворимые ГА и КС АГ.

Антигенная активность. У естественно заражённых лошадей и людей обнаруживают ВНА и анти-ГА, которые выявляются через неделю и сохраняются в течение нескольких лет. КСА появляются значительно позже и исчезают раньше. В Китае обнаружен высокий процент серопозитивных в PH сывороток среди животных: свиней - 100%, лошадей - 94, КРС - 92 и собак - 66% (14). АГ-анализ данного вируса изучен с помощью монАТ (27).

Антигенная вариабельность и родство. Между штаммами ВЯЭ существуют АГ- различия. Выявлено 2 иммунологических типа вируса. Более однородную и близкую группу образуют шт. Накаяма, СП-69 и Пекин-1. Другой тип представлен шт. Джагар-01. Установлено родство всех штаммов ЯЭ с вирусом лихорадки Западного Нила, в особенности у шт. Джагар-01 со шт. Нр-94. В АГ-отношении ВЯЭ близок к вирусам Муррея, энцефалита Сан- Луи и Илеус. Степень АГ общности разная. Более родственны вирусы ЭЯ, энцефалита долины Муррея, вирус Илеус стоит несколько обособленно. Все 5 изолятов ВЯЭ по всей длине генома имели высокую гомологию нуклеотидных последовательностей (более 93%). Примерно такой же степенью гомологии характеризовались и белки 5 исследованных изолятов ВЯЭ (31).

Гемагглютинирующие свойства. Вирус агглютинирует эритроциты цыплят, гусей, голубей, петухов, барана, морской свинки, кролика. Г А получают из мозга мышей и из жидкости инфицированных культур. На протяжении 90 пассажей вируса в культуре почек эмбриона овцы ГА регулярно обнаруживался в титре 1:128 - 1:512. В культурах ФЭК ГА находят лишь в 1-ом пассаже после заражения мозговой взвесью вируса. Оптимум pH для хранения АГ из ткани мозга 6,3-6,5, для культуральных 6,0-6,2. Старые лабораторные штаммы могут утрачивать Г А активность.

Локализация вируса, вирусоносительство и вирусовыделение. У многих животных развивается вирусемия, что имеет большое значение в рассеивании вируса. У мексиканских летучих мышей вирус размножается в буром жире, депонируется там и поэтому поддерживается 15-30-дн вирусемия. Вирус проходит через плаценту и обнаруживается в органах плода животных.

Эксперементальная инфекция. Вирус патогенен для мышей. Инкубационный период болезни при заражении в мозг 4-5 дн, при периферическом введении 30-60 сут, многие животные выживают. Титры вируса в мозге заражённых мышей в пределах 10'6 и 10'8. Восприимчивы белые крысы не старше 14 дн, молодые хомяки, морские свинки, обезьяны, ягнята и овцы. Экспериментальную инфекцию удаётся легко вызвать у мышей, щенков, коз, свиней, летучих мышей и птиц различных видов.

Культивирование. Благоприятной средой для размножения вируса является КЭ. Вирус культивируется также в различных тканях и клетках in vitro. ЦПД его проявляется лишь в немногих культурах и определяется свойствами штамма и клеточной линии. Оно постоянно наблюдается в первичных культурах почек эмбрионов свиньи, овцы и почек хомяка. Максимальное накопление вируса происходит на 2-3-и сут, к этому же сроку развиваются и ЦПИ.

Созревание вирионов происходит в цистернах эндоплазматического ретикулума, а транспорт вируса происходит внутриклеточной секреторной системой. Выход вируса осуществляется за счет лизиса клеток или “обратного” фагоцитоза.

Пассажи вируса ЯЭ на клетках HeLa приводят к аттенуации вирулентности для мышей. После 6-и пассажей на клетках 4-х штаммов ВЯЭ дикого типа: Nakayama original, 826309, SA14 и Beijing-1, шт. Nakayama original и 826309 стали аттенуированными для мышей, причем аттенуация сохранялась при пассажах на первичных клетках КЭ и клетках LLC- МК2 и С6/36. Аттенуация сопровождалась изменением связывания с препаратами мембранного рецептора из мозга мышей, что указывает на участие в аттенуации белка оболочки El. Сравнение нуклеотидных последовательностей генов структурных белков вирулентных шт. Nakayama original и 826309 и их аттенуированных вариантов обнаружило соответственно 37 и 46 замен нуклеотидов, вызывающих замены соответственно 8 и 9 аминокислотных остатков. Белок оболочки Е и мембранный белок 2-х аттенуированных ВЯЭ идентичны, за исключением одной аминокислотной замены в белке оболочки Е (7).