РИНОПНЕВМОНИЯ ЛОШАДЕЙ

Ринопневмония лошадей (РПЛ, вирусный аборт кобыл, половая экзантема лошадей, ри- нотрахеит лошадей) - остро протекающая контагиозная болезнь, характеризующаяся острым респираторным заболеванием жеребят и абортами у кобыл во второй половине жеребости, которые часто проходят без заметных симптомов и предвестников родов (1, 2). Болезнь впервые описали в США. Затем ее диагностировали в Германии, Франции, Италии, Югославии, Австрии, Венгрии, в последние годы - в Румынии, Чехословакии, Польше, странах СНГ и России.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Вирус ринопневмонии (герпесвирус 1-го типа) вызывает острое респираторное заболевание жеребят в возрасте 6-9 мес, аборты у жеребых кобыл и паралитический синдром. В естественных условиях инкубационный период в среднем 3-4 нед. Болезнь протекает в респираторной форме и может сопровождаться абортами. Первая форма встречается чаще, поражает животных осенью и в начале зимы. Она характеризуется повышением температуры тела, депрессией, отсутствием аппетита, конъюнктивитом и воспалением слизистой оболочки носа, иногда ринофаринги- том. Ринит сопровождается истечением из носа, увеличением подчелюстных лимфоузлов. Легкие поражаются редко. Через 10-15 дн больные выздоравливают. У некоторых животных бывают кашель и затрудненное дыхание вследствие развившейся перипневмонии. В таких случаях болезнь нередко осложняется бактериальной инфекцией, что обычно приводит к летальному исходу.

При наличии в хозяйстве жеребых кобыл ринопневмония может вызывать аборты, причем абортируют как кобылы с респираторной формой болезни, так и не имеющие видимых симптомов болезни. Аборт происходит на 8-10-м мес жеребости, хотя у некоторых может быть и на 6-м мес. Абортируют до 90% больных животных. При вирусном аборте родовые пути приходят в норму так же быстро, как и у здоровых кобыл после родов. Общее состояние кобыл заметно не нарушается. Очень редко бывают осложнения в виде параличей, заканчивающихся гибелью животного. Вирусный аборт редко наблюдают дважды у одной и той же кобылы. Эго свидетельствует о наличии иммунитета. Однако описаны случаи повторного аборта через несколько лет.

Для ринопневмонии характерны изменения, обнаруживаемые в органах абортированных плодов или павших вскоре после рождения жеребят. У плодов развивается острый или хронический гепатит, вызывающий их гибель. В печени появляются многочисленные серовато-белые очажки некроза, в грудной полости - серозно-геморрагическая жидкость, отек легких и выпот фибрина. В мышцах, под капсулой селезенки и печени, на плевре, брюшиие, перикарде и эпикарде видны точечные кровоизлияния. Слизистые оболочки плода, особенно конъюнктива, желтушны. При гистологическом исследовании срезов печени, мышцы сердца, эндотелия сосудов, легочных альвеол, эпителия щитовидной железы абортированных плодов очень часто по периферии очагов некроза обнаруживают внутриядерные включения типа А Коудри. Включения окрашиваются ацидофильно в виде гомогенной массы, но иногда в виде нежно-зернистой структуры. Включения считают тельцами вирусной природы. Они имеют важное диагностическое значение.

Помимо абортов, у кобыл вирус вызывает рассеянный менингоэнцефаломиелит. Он характеризуется некротизирующим васкулитом, очаговыми размягчениями в головном и спинном мозге, скоплением лимфоцитов и нейтрофилов в околопозвоночных ганглиях. Иногда наблюдается парез. Описана вспышка атаксии и параличей на конном заводе у чистокровных лошадей, вызванная герпесвирусом лошадей типа 1. Патогенез. Вирус размножается и накапливается в слизистых оболочках верхних дыхательных путей и в легких, вызывая ринопневмонию. У беременных кобыл вирус проникает в матку, плод и околоплодные оболочки, вызывая патологический процесс и аборт во второй половине беременности.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Заболевание лошадей вызывают герпесвирусы трех типов: Equine herpesvirus type 1 - вирус классической ринопневмонии лошадей (вирус Долла), шт. Kentucky D; Equine herpesvirus type 2 - возбудитель коитальной экзантемы (Equine coital exanthema) представлен шт. EHV-2, HKV-2, HBM-7, HKV-4; Equne herpesvirus type 3 - возбудитель цитомегало- подобной инфекции лошадей (Equine cytomegalolike virus) представлен шт. LK-Plummer-2.

Вирусы типов 2 и 3 клеточно связанные, вызывают ЦПД в культуре клеток почки эмбриона лошади, ягненка и кролика с образованием внутриядерных включений. Шт. EHV-2, HKV-2 и HKV-4 образуют синцитий. Equvine herpesvirus type 1 впервые выделили Димок и Эдвардс (13). Вирус РПЛ (EHV-1) имеет 2 подтипа: ПТ-1 и ПТ-2. Вирус ПТ-1 выделяли из абортированных плодов и новорожденных жеребят, а ПТ-2 - при респираторном заболевании. ПТ-2 в отличие от ПТ-1 не репродуцируется в культуре клеток эмбриона кошек и морских свинок, почки кролика и теленка, не выявлялся в лейкоцитах крови лошадей, слабо размножается и не выделяется из носоглотки, не вызывал аборта у жеребых кобыл после интраназального введения.

Морфология и химический состав. Вирион содержит центральное ядро размером 60 нм, светлую зону и пограничную мембрану; диаметр вириона около 100 нм (Рис. 88). В культуре клеток почки хомяка через 15-18 ч после заражения обнаруживаются вирусные частицы 3-х типов: мелкие (40 нм), средние (до 100 нм), крупные (до 160 нм); в цитоплазме и вне клеток бывают частицы до 220 нм.

Вирионы могут быть с оболочкой и без оболочки. Используя "мягкие" детергенты (например, нонидент Р-40) или обрабатывая ультразвуком удавалось отделить оболочку вириона. Вирионы, лишенные оболочки, отличаются от частиц с оболочками размерами и плавучей плотностью. Крупные вирусные частицы с оболочкой встречаются в ядре единично, в цитоплазме чаще, а вне клеток в большом количестве.

Вирионы, очищенные центрифугированием и обработкой нуклеазой, имеют константу ; седиментации в градиенте сахарозы около 200S. Количество ДНК на одну частицу равно ; 4,75Ю10Д, что составляет свыше 9,2%. Основания ДНК спарены: аденин приблизительно с | равным количеством тимина, гуанин с цитозином. Отношение (А+Т)/(Г+Ц) = 0,78, в то время как для ДНК клетки хозяина оно равно 1,4.

С помощью электрофореза изучен полипептидный состав оболочечных и безоболочеч- ; ных вирионов, а также их оболочек. В вирионах с оболочками идентифицировано 20 поли- : пептидов с мол.м. от 115 до 13000 Д. Безоболочечные вирионы содержали 14 полипепти- I дов, а сами оболочки 3 полипептида. При электрофорезе полных вирионов обнаружено 3 зоны, содержащие липопротеид, и 4 зоны - гликопротеин. По-видимому, все они имеют оболочечное происхождение, так как в безоболочечых вирионах не выявлялись.

Установлено, что последовательность гликопротеинного гена ГВЛ типа 1 гомологична последовательности гена вируса herpes simplex для гликопротеина ДВ (3). В геномах дефектных вирионов герпесвируса лошадей типа 1, участвующих в онкогенной трансформации и персистентной инфекции, имеется одна открытая рамка считывания. Она кодирует белок с мол.м. 30000 Д (10). Ген 28 ГВЛ типа 1 кодирует гликопротеины с мол.м.300 Д (9).

Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению концентрации водородных ионов. Однако инфекционность его сохраняется при сравнительно широких колебаниях pH. Оптимальный для его хранения pH 6-6,7; при pH ниже 4 и выше 10 вирус быстро инактивируется. Он лучше сохраняется при 4-6°С, хуже - при 20°С. В культуральной жидкости остается вирулентным при 56°С до 10 мин, при 50°С - 20-30 мин, при 37°С - от 1,5 до 7 сут, при 4°С -

7-8 мес, при -10-18°С - 12-14 мес. В инфицированной ткани, замороженной при -18-20°С, сохраняет активность до 2 лет. В тканевых суспензиях, приготовленных на солевых р-рах (pH 7-7,4) с 20% нормальной лошадиной сыворотки, он активен при 4°С не менее 2 нед; в буферном р-ре без добавления сыворотки вирус быстро инактивируется.

Вирус хорошо консервируется 50%-ным р-ром глицерина, оставаясь активным при 4°С 5 мес. Дезоксихолат натрия в разведениях 1:100 и 1:1000 при 22-24°С инактивирует его в течение 45-60 мин; 1%-ный этанол, метиловый спирт, гепарин или ЕДТА не влияют на инфекционность культурального вируса. Он чувствителен к действию трипсина, эфира и хлороформа.

АГ структура детально не изучена. КС АГ можно разделить на S (растворимый) и V (вирусный).

АГ вариабельность и родство. Известны вирусы РПЛ 1-го типа: американский эталонный шт. Kentucky (иммунологически идентичны ему шт. К-69 и С-69) и японский Н-45 (иммунологически идентичны ему шт. Racarmy 183, Hannover 1835 и VI00 (64).

Спектр патогенности в естественных условиях. Болеют лошади всех возрастов и пород независимо от пола, а также ослы, мулы и пони. Человек, КРС, мелкий рогатый скот и свиньи к вирусу не восприимчивы.

Локализация вируса. Вирус проникает в организм главным образом через органы дыхания и локализуется в верхних дыхательных путях и легких, вызывая симптомы ринита или ринопневмонии. Из первичного места размножения (слизистых оболочек дыхательных путей и конъюнктивы) после фазы вирусемии, соответствующей периоду лихорадки и лейкопении, вирус попадает в матку, плод и околоплодные оболочки, где размножается, вызывая патологический процесс, приводящий к аборту. Заражение плода происходит медленно, поскольку аборт наступает через 1-4 мес после респираторной формы болезни. Вирус обладает тропизмом к эпителиальной и эндотелиальной тканям.

Переболевшие ринопневмонией животные могут выделять вирус во внешнюю среду с истечениями из носа и половых органов до 2 мес. ГВЛ типа1 экскретируется с выделениями из носа, являясь источником заражения для других лошадей (8).

АГ активность. Вирус обладает выраженной АГ активностью. У реконвалесцентов обнаруживают КСА и ВНА. У переболевших кобыл через 10-14 дн после заболевания индекс нейтрализации сывороток колебался от 3 до 5 lg. У экспериментально зараженных лошадей ВНА образовывались медленнее, но сохранялись дольше, чем КСА. ПА иа обнаружено. Для получения АГ в РСК используют очищенный методом бляшек шт. P-19-Toowoomba (8-10- го пассажа).

Экспериментальная инфекция. Может быть воспроизведена на молодых жеребятах, жеребых кобылах, беременных крольчихах и морских свинках. При внутривенном, интра- назальном и интратрахеальном введениях вируссодержащего материала у молодых жеребят появляется типичная картина ринопневмонии (гипертермия, поражение верхних дыхательных путей, лейкопения) и КСА. У экспериментально зараженных лошадей количество лейкоцитов, Т-, В-лимфоци-тов снижается. Вирулентный штамм оказывает иммунодепрессив- ное действие, что позволяет дифференцировать реакцию организма на вакцинный и вирулентный вирусы. У зараженных вирусом кобыл за 7-10 дн, реже за 15-20 дн до аборта, повышается температура тела, удерживающаяся 2-3 дн. Иногда температурная реакция может быть и во время аборта. При внутривенном введении вируса инкубационный период колеблется от 4 до 76 дн (в среднем 22 дн), при инокуляции вируса непосредственно в матку - от 3

до 9 дн, при спонтанном заражении - от 1 до 4 мес. Предшествующая аборту стадия инфлюэнцы при легком ее течении может пройти незамеченной. Кобылы, зараженные после 9 мес жеребости, могут принести мертвого или нежизнеспособного жеребенка. У зараженных кобыл появление симптомов болезни коррелирует с выделением вируса с носовыми секретами. Виремия обычно связана с лейкоцитами крови, проявляется как непродуктивная латентная инфекция этих клеток и длится в течение 9 дн.

Латентная вирусная инфекция выявлялась также и в моноцитах. Замораживание и оттаивание лейкоцитов разрушало их инфекционность, но добавление к лейкоцитам ДМСО до замораживания предотвращало инактивацию вируса. Беременные морские свинки абортируют через 3-8, а иногда и через 15-20 дн после интраперитонеального заражения. Удается заразить хомячков 3-4-дн возраста, новорожденных котят, мышей и воспроизвести клиническую картину энцефаломиелита с характерными внутриядерными включениями в клетках нейроглни. Наиболее чувствительны к ринопневмонии новорожденные хомячки. Они погибают через 2-6 дн после внутрибрюшинного или интраназального заражения вируссодержащей суспензией, приготовленной из легких или печени абортированных плодов. Вирионы, лишенные оболочки, патогенны только для хомячков и в больших дозах.

Культивирование. Для культивирования и пассирования вируса используют мышат- сосунков и хом'ячков (внутрибрюшинное заражение), КЭ 8-12-дн возраста (в желточный мешок, аллантоисную полость или амнион), а также культуры клеток почечной ткани различных животных (лошади, теленка, поросенка, собаки, овцы), тестикулов бычков или их эмбрионов. Наиболее чувствительна культура клеток почки лошади, особенно молодого жеребенка. Вирус размножается также в культурах некоторых перевиваемых линий клеток (HeLa, КВ, Детройт-6, РК-15). Оба типа Т-I (НН-1) и II (ТН-20) удалось адаптировать к культуре клеток почки свиней. По чувствительности к вирусу РПЛ первичные и перевиваемые линии клеток можно разделить на 5 групп в сторону ее снижения: 1) почка свиньи (ПС) и почка лошади (ПЛ); 2) почка теленка (ПТ), тестикулы теленка (ТТ), почка хомячка (ПХ), ВНК-211; 3) перевиваемые линни клеток: HeLa, TL (амнион человека), Lu 106 (легкие человека), AND (почка обезьяны), КЛ (клетки роговицы кролика); 4) фибропласты КЭ; 5) ML (мышиные фибропласты).

Клетки первой группы пригодны для выделения, накопления и пассажей всех изученных штаммов вируса РПЛ. В этих культурах на 3-5-е сут после заражения вирус уже с первого пассажа проявляет ЦПД; образуются очаги округлых клеток с последующим разрушением всего клеточного пласта. Развитие ЦПД в культуре клеток ПС и ПЛ завершается их полным лизисом. В клетках 2-й группы вирус размножается, но ЦПД наступает медленно, без полного лизиса культуры. По мере адаптации титр вируса повышается и к 4-5 пассажу достигает 104’75- Ю5,0 ТЦДзо/мл.

В культурах клеток 3-ей группы размножаются ие все штаммы вируса РПЛ. В клетках 4-й группы вирус размножается слабо и не вызывает ЦПД. В культуре клеток печени КЭ и почечного эпителия морских свинок хорошо развивается болгарский шт. 1605. И наконец, культура клеток мышиных фибробластов, относящаяся к пятой группе, вообще не пригодна для размножения вируса. Однако в клетках почки мышей вирус герпеса лошадей типа 1 может размножаться и лучше репродуцироваться при 33,7°С, чем при 36 или 38°С. В клетках паренхимы печени КЭ, в культурах клеток, в которых хорошо репродуцируется вирус РПЛ, находят ацидофильные внутриядерные включения типа А Коудри, не отличимые от тех, какие обнаруживаются у больных лошадей. Вирус, прошедший несколько пассажей в культуре клеток ПЭК, размножается в перевиваемых линиях клеток почки телят и овец, вызывая характерное ЦПД. Вирус, пассированный в культуре клеток точки кролика, козы и свиньи, не пассировался в культурах клеток почки морской свинки, хомячков и фибробластов КЭ. Получены дефектные интерферирующие частицы (ДИЧ) вируса в серийных пассажах его в культуре фибробластов мыши (линии ML) с высокой множественностью инфекции. При выделении вируса многие штаммы требуют предварительной адаптации к той или иной системе культивирования, особенно это относится к культивированию вируса на хомячках, мышатах-сосунках и КЭ. В 1966 г. предложен метод получения бляшек в субкультуре клеток почки коровы с жидким покрытием. Метод применяют для титрования ВНА.

ГА и ГАд свойства. Вирус агглютинирует эритроциты лошади и морской свинки при 4 и 37°С. Активность ГА не связана с липидами, ои является интегральной частью вирусной оболочки, а не растворимым АГ, как предполагалось раньше. Он не инактивируется при 56°С, сохраняется при 4 и 37°С, а также при воздействии нейраминидазы холерного вибриона, не нейтрализуется сыворотками лошадей-реконвалесцентов, но нейтрализуется гипе- риммунными сыворотками крови кроликов. ГА-активность, обусловленная участием ди- сульфидных групп, разрушается протеолитическими ферментами (трипсином, альфа- хемотрипсином и проназой), резистентна к действию растворителей липидов (хлороформу, эфиру) и фосфолипазе С.

В свежих препаратах вируса титры ГА прямо пропорциональны инфекционности, и 1ГАЕ приравнивается к 107 БОЕ в клетках РК-15. В очищенных препаратах вируса 1 ГАЕ эквивалентна 0,65 мг белка. При внесении в инфицированную культуру клеток с выраженным ЦПД отмытых эритроцитов лошади наблюдается очаговая ГАд. Однако этот феномен проявляется недостаточно четко и не может служить надежным диагностическим тестом.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больное животное, выделяющее вирус через дыхательные пути и особенно с абортированным плодом. В естественных условиях вирус передается воздушно-капельным путем. Факторами передачи инфекции служат загрязненные вирусом корма, вода, подстилка и т.п. Жеребцы могут стать переносчиками вируса при коитусе. Вероятно, собаки, лисицы и птицы могут разносить вирус вместе с кусками абортированных плодов из одного хозяйства в другое. Основные вспышки эпизоотических абортов у лошадей связаны с ГВЛ-4 (19). ГПЛ-4 удается выделить после гибели животного из тканей, взятых в участке пораженных нервов (20).