Пиперазины

Пиперазин гексагидрат поглощает неспецифичной коротковолновой части УФ-спектра, что препятствует его определению с помощью спектрофотометрических методов анализа, жидкостной 140 хроматографии с УФ-детектором и тонкослойной хроматографии с хроматоскопическим определением положения пятен на пластинке. Известны методы анализа пиперазина методом газожидкостной хроматографии в виде нитрозаминов (В.A. Dawson, R.C. Lawrence, 1987) или ацетилированных производных (N. Fresenius,

1988).

И.Е. Шумакович в 1993 г. (отчет ВИГИСа, неопубл.) определяла микроколичества пиперазина гексагидрата в пробах животного происхождения методом реакционной газожидкостной хроматографии с извлечением препарата из проб изопропиловым спиртом и очистки экстракта перераспределением в системе аце- тонитрил-гексан. Нижний предел определения - 0,5 мг/кг. Степень определения - 80±5,0 %.

Реактивы и растворы. Изопропиловый спирт х.ч.; ацетонитрил х.ч.; гексан х.ч.; метанол х.ч.; пиридин ч.д.а.; уксусный ангидрид х.ч.; смесь для ацетилирования (уксусный ангидрид и пиридин) в соотношении 3 : 2; натрий сернокислый безводный

ч.д.а.; стандартный раствор пиперазина гексагидрата безводный

ч.д.а.

Приборы и посуда. Хроматограф «Chrom-5» с плазменноионизационным детектором; хроматографическая колонка стеклянная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм; весы аналитические; гомогенизатор; прибор для встряхивания; вакуумный ротационный испаритель; насос водоструйный; колба коническая на 100 мл; воронки химические; фильтры бумажные; колбы круглодонные со шлифами на 50 и 100 мл; воронки делительные на 250 мл; цилиндры на 100 мл; пипетки на 0,2 и 2 мл; микрошприц на 10 мкл.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Анализируемую пробу животной ткани (мышцы, печень, легкие, сердце и др.) массой 5-10 г (точная навеска) гомогенизируют и помещают в коническую колбу на 100 мл, заливают 20 мл изопропилового спирта и экстрагируют при постоянном встряхивании в течение 60 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 100 мл, а пробу повторно заливают 20 мл изопропилового спирта и экстрагируют при постоянном встряхивании в течение 30 мин. Экстракты объединяют в круглодонной колбе.

Экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе. Остаток последовательно растворяют в 20 мл ацетонитрила и 20 мл гексана и количественно переносят в делительную воронку. После осторожного перемешивания слоям дают разделиться. Верхний гексановый слой отбрасывают. Переэкстракцию с гексаном повторяют дважды. Ацетонитрильный слой переносят через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в круглодонную колбу на 50 мл и упаривают досуха в вакууме при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток ацетилируют, для чего колбу обмывают 0,2 мл метанола и 0,2 мл смеси уксусного ангидрида: пиримидина (3 : 2) и выдерживают 30 мин при температуре 60-70 °С. Продукт реакции упаривают досуха на ротарном испарителе при температуре 70-80 С и растворяют в 0,2 мл метанола. Аналогично ацетилируют 0,2 мл стандартного раствора пипе- разина гексагидрата.

Условия хроматографирования: газожидкостной хроматограф типа «Chrom-5» с плазменно-ионизационным детектором; стеклянная колонка длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм; сорбент (0,125-0,15) с нанесенной неподвижной фазой ХЕ-60 (5 % от массы носителя); скорость подачи азота 40 мл/мин.; температура инжектора 245, термостата 210, детектора 250 °С; объем вводимой в хроматограф пробы 2-10 мин; скорость протяжения ленты самописца 0,15 см/мин; время удерживания ацетилирован- ного производного пиперазина 7 мин.

Обработка результатов анализа. Количественное определение пиперазина гексагидрата проводят по его ацетилированному производному. Содержание пиперазина гексагидрата в пробе (X, мг/кг или мкг/г) рассчитывают по формуле

Н2хСх V

X -               ,

HxxPxVx

где #1, #2 - высота пика анализируемого производного пиперазина в стандарте и пробе, мм; С - содержание препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг; V - объем конечного раствора, из которого отбирают аликвоту для хроматографирования, мкл (200-500 мкл); V\ - объем аликвоты, вводимой в хроматограф, мкл (2-10 мкл); Р

• масса анализируемой пробы, г.