ИНФЕКЦИОННЫЙ ГАСТРОЭНТЕРИТ СВИНЕЙ

Инфекционный гастроэнтерит свиней (ИГС) (трансмиссивный гастроэнтерит свиней - ТГС, болезнь Дойла и Хитчингса) - остро протекающая высококонтагиозная болезнь, главным образом поросят до 3-мес возраста, проявляющаяся рвотой, тяжелой диареей и высокой смертностью (часто до 100%) среди поросят до 2-нед возраста (101).

ИГС первыми описали Дойл и Хитчингс (США) в 1946 г. Вспышки его отмечены в Японии (1956), Великобритании (1957), Канаде (1964) и во многих странах Европы, в т.ч. в странах СНГ. Показано, что 19-54% свиноферм Европы и Северной Америки серопозитивны по ТГС (46). Распространенность в большинстве европейских стран составляет около 100%. Эта ситуация обусловлена респираторньм вариантом вируса ИГС, названным респираторным коронавирусом свиней (РКВС), который быстро распространился с 1986 г. (32, 88, 89, 90а). Экономические потери весьма значительны (19, 78, 81, 92, 93). Они складываются из высокой смертности новорожденных поросят, низкой эффективности лечения, сложности предупреждения заноса вируса в весеннее время, поскольку существенную роль в этом играют птицы, особенно скворцы. Эффективность коммерческих вакцин весьма ограничена (82,83,100 ).

Симптомы и патологоанатомические изменения. Вирус поражает поросят до 3-нед возраста. В более старшем возрасте они переболевают без летального исхода. У больных кормящих свиноматок снижается продукция молока. Болезнь клинически проявляется отсутствием аппетита, рвотой, диареей (беловатые, желтоватые или зеленоватые пенистые фекалии), обезвоживанием, слабостью и высоким падежом. Инкубационный период у 1-5-дн поросят длится 12-18 ч, погибают все заболевшие. У 6-10-дн поросят инкубационный период - 18-36 ч, смертность среди них достигает 67%. С возрастом животных инкубационный период увеличивается, смертность уменьшается. Относительно высокая чувствительность к вирусу ИГС может быть связана со снижением цитотоксичностн лимфоцитов в отношении клеток, инфицированных вирусом у свиноматок при опоросе, а также отсутствием цитотоксичности лимфоцитов у поросят в течение 1-й нед после рождения (35). В этих условиях поросята могут быть защищены только АТ матери, полученными с молозивом и молоком. Кроме энтероцитов, поражение которых сопровождается атрофией ворсинок тонкого отдела кишечника, клетками-мишенями для вируса могут служить альвеолярные макрофаги (70), а также клетки миндалин и др. органов. В клетках миндалин больных поросят АГ ВИГС выявляли даже чаще, чем в клетках тощей кишки.

Различают 3 стадии болезни: предклиническую, клиническую и выздоровления. В пред- клинической стадии наблюдают снижение аппетита, сонливость, повышенную жажду, иногда лихорадку (41-41,5°С) и рвоту. Клинический период характеризуется сильной диареей с выделением газов. Фекалии серо-красного или жёлто-зелёного цвета, выделяются самопроизвольно. Стадия выздоровления более длительная. Заболевшие поросята испытывают сильную жажду, пьют много воды и сосут молоко, которое в непереваренном виде выходит с жидкими фекалиями. Потеря жидкости ведёт к сильному обезвоживанию организма, вследствие чего развиваются метаболический ацидоз и другие изменения в электролитическом балансе крови. Смерти обычно предшествует кома, наступающая на 3-й день. У выживших поросят через 3-4 дня начинается регенерация ворсинок диарея прекращается. Болезнь длится 2-5 дн, смертность снижается по мере увеличения возраста поросят. Возрастной фактор также влияет на продолжительность и тяжесть болезни. У свиноматок, заражённых при контакте с больными поросятами, повышается температура тела, исчезает аппетит, отмечаются депрессия, умеренная диарея и прекращение лактации. Выздоровление наступает через 7-10 дн. Выжившие поросята отстают в росте. Иногда к желудочно- кишечным расстройствам присоединяется энцефаломиелит с гиперестезией. От 43 до 98% взрослых свиней в различных странах имеют к вирусу ВНА. Материнские АТ исчезают у поросят к 15 нед жизни. Затем появляются активно выработанные АТ за счёт инаппарантно перенесённой инфекции под защитой материнских АТ. Вирусный гастроэнтерит, в основном, протекает в ассоциации с бактериальными инфекциями и чаще с колибактериозом (37,9%), вызываемым шт. 0-138, 0-103, 0-78, 0-86 и 0-1. Необходимо учитывать, что РКВС обычно вызывает субклиническую респираторную инфекцию. Лихорадка наблюдалась после интратрахеального заражения, тогда как другие исследователи наблюдали пневмонию со смертельным исходом (85, 110, 111), а также выраженную потерю массы у 90-дн поросят, что не наблюдалось у 15-нед свиней.

Патизменения у поросят-сосунов, павших в первые 3 дня жизни, наблюдают, главным образом, в желудке и тонком кишечнике. В желудке небольшое количество свернувшегося молозива, слизистая его набухшая, покрасневшая, местами ослизневшая. Аналогичные изменения и в тонком кишечнике. У поросят 2-нед возраста картина вскрытия более выражена. Труп истощен, конъюнктива, слизистые носовой и ротовой полостей бледные, с синюшным оттенком, скелетные мышцы вялые, суховатые. На ушах, брюхе, шее часто появляются красно-фиолетовые пятна. Слизистая оболочка дна желудка резко гиперемирована, набухшая, покрыта слизью, иногда усеяна точечными кровоизлияниями, местами эрозирована и изъязвлена. Тонкий кишечник растянут газами, заполнен жидким содержимым, в состоянии катарального или катарально-геморрагического воспаления. Слизистая тонкого кишечника полнокровна или в состоянии катарально-геморрагического воспаления. Брыжеечные, портальные, почечные и желудочные лимфоузлы набухшие, сочные, селезенка полнокровна. Печень бледная или пятнисто окрашена, дрябловатой консистенции. Почки бледные, иногда с мелкими кровоизлияниями под капсулой. Слизистая мочевого пузыря набухшая, усеяна кровоизлияниями. Сердце увеличено, миокард серого цвета, дрябловатый, под эпи- и эндокардом по ходу сосудов мелкие кровоизлияния. Легкие без особых изменений или несколько полнокровные. Оболочки головного мозга гиперемированы, вещество мозга иногда размягчено, отечно, с мелкими кровоизлияниями. У подсвинков и взрослых свиней картина вскрытия сходна с таковой у 2-нед поросят, но слабее выражена.

У поросят, погибших через 1-3 дня после рождения, в желудке и тонком кишечнике устанавливают слизистую дистрофию и некроз эпителиальных клеток, полнокровие и отек соединительно тканной пластинки и подслизистого слоя кишечника. У поросят 2-нед возраста обнаруживают более глубокие изменения. В желудке - полнокровие и кровоизлияния, дистрофия покровных клеток, обширные эрозии и некрозы, окруженные клеточными инфильтратами из лейкоцитов. Часто отмечают серозный или фибринозный гастрит. В тонком кишечнике гиперемия, гиперсекреция, вакуолизация, некроз и десквамация эпителия ворсинок вплоть до полного их оголения. Большая часть ворсинок атрофирована и деформирована. Собственный и подслизистый слои гиперемированы, отечны, часто с кровоизлияниями, инфильтрированы лимфоидными, эозинофильными и плазматическими клетками. В толстом кишечнике гиперемия, иногда дистрофия и некроз клеток эпителия крипт. Селезенка и лимфоузлы инфильтрированы эритроцитами, строма их отечна. В печени гиперемия, зернистая дистрофия гепатоцитов и нарушение балочного строения, в почках зернистая дистрофия канальцевого эпителия, в сердце изменения тинкториальных свойств саркоплазмы мышечных волокон, отек межмышечной соединительной ткани. В головном мозге находят пёриваску- лярные лимфоцитарные “муфты”, очаги пролиферации глии (2) (Рис.25, 29, 30).

Патогенез. Попадая в организм через ЖКТ или органы дыхания, вирус проникает в эпителий тонкого кишечника. Размножаясь в цитоплазме клеток ворсинок слизистой оболочки, он вызывает дегенерацию и некроз их. Под влиянием продуктов распада этих клеток и токсинов происходит нарушение гемодинамики и усиливается проницаемость стенок мик- роциркулярного русла, что способствует проникновению части вируса в кровь. Однако основная масса вируса локализуется в эпителии кишечника, вызывая дистрофию, некроз и де- сквамацию клеток ворсинок, из-за чего последние укорачиваются (атрофируются). Наиболее выраженный некроз клеток и атрофию ворсинок отмечают в каудальной части 12-перстной, тощей и подвздошной кишок. Названные изменения эпителиальных клеток являются причиной острого нарушения процессов пищеварения, диспепсии, диареи и обезвоживания, нарушения обмена веществ. Отмечают ацидоз, общую интоксикацию и гибель животных.

Распространение вируса ИГС по эпителию кишечника происходит путем выделения вируса из инфицированных клеток в просвет кишечника, а затем заражаются близлежащие клетки через апикальный домен (98). При инфекции РКВС атрофии сосочков тонкого кишечника не наблюдается. Однако в легких развивается интерстициальная пневмония у большинства инокулированных животных (39,86,111).

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Вирусную этиологию подтвердил Doyle и Hutchings (1946), когда они описали фильт- руемость этиологического агента (45). Вирус относится к семейству Coronaviridae роду Coronavirus (14, 105). Вирус инфекционного гастроэнтерита свиней (ВИГС) впервые выделил и описал японский исследователь Тайима (1970). Помимо ВИГС, к коронавирусам свиней также относятся Г A-вирус энцефаломиелита и вирус эпизоотической вирусной диареи. Последняя протекает несколько легче. Видимо, к группе эпизоотической вирусной диареи следует отнести вирус КВ-777, вызывающий массовые вспышки диареи у свиней разных возрастов и индуцирующий образование АГ в цитоплазме тонкого и толстого кишечника. При электронной микроскопии его обнаруживают в содержимом кишечника и фекалиях больных поросят.

Морфология и химический состав. ВИГС оболочечный, плеоморфный, диаметром 60- 160 нм (55), имеет один слой булавообразных отростков (Рис.26, 27) на поверхности проекции длиной 12-25 нм (105). Вирус содержит одну большую полиаденилированную плюс РНК (>23кД) (71Ь, 105). РНК, экстрагированная из вириоиов, обладает инфекционностью (28). В процессе репликации синтезируется 5-7 субгеномных мРНК с общими 3'- концами для продукции вирусных белков (30, 64, 71Ь, 115а). Определена нуклеотидная последовательность по 3 - концу генома, соответствующая мРНК (67, 94, 95). Плавучая плотность вирионов в градиенте сахарозы составляет 1,18-1,20 г/см3 (28, 66). Фосфо- и гликолипиды, инкорпорированные в оболочку, имеют клеточное происхождение, таким образом, оболочка вириона клеточнозависимая. ВИГС содержит 3 главных структурных белка: нуклеокапсид- ный белок (N), мелкий оболочечный гликопротеин (М) и большой гликопротеин пепломеров (S) (106). В зрелом вирионе N-протеин “вплетен” в вирусную РНК, образуя рибонуклеопро- теидный комплекс. Гетерофильный N-конец гликопротеина М выступает из вириона и имеет единственный доступный гликопротеиновый сайт и обеспечивает индукцию КСА и ВНА, а также интерферона (71а, 117). Гликопротеин S (или пепломерный белок) мол.м. 195-220 кД смотрится на электронограммах как корона вируса. Он отвечает за прикрепление вируса к клетке, расплавление мембраны и индукцию комплементнезависимых ВНА. Очищенный S- гликопротеин индуцирует образование ВНА, которые нейтрализуют репликацию вируса на всех стадиях (84,108).

Определена последовательность 3' главных 8300 нуклеотидов геномной РНК ВИГС шт. Perdue, адаптированного к клеткам (Tib). Этот участок генома содержит 3 главных структурных гена с согласованностью коронавирусной ориентации 5' - S - М - N -3' и 4 больших открытых рамки считывания, которые кодируют потенциальные вирусные протеины.

5' часть генома кодирует вирусную репликазу/транскрипгазу как и у вируса ИБК (27). Степень гомологии аминокислот среди структурных белков ВИГС и антигенно не связанных коронавирусов подтверждает, что эти коронавирусы имеют общее эволюционное происхождение. Однако методом перекрестной гибридизации нуклеиновой кислоты среди антигенно не связанных коронавирусов родства не наблюдается в связи с низкой базой гомологичных последовательностей (22, 104). Недавно был секвенирован 3' конец геномной РНК РКВС (96). Сопоставление нуклеотидной и аминокислотной последовательностей РКВС и ВИГС выявляет 96% гомологии. Геном РКВС содержит 2 отличающиеся карты: 1 - в гене S недостает 672 нуклеотидов в 5' зоне, кодирует большой белок пепломеров; 2 - первая открытая рамка считывания от гена S имеет двойную делецию. Это генетическое изменение обусловливает измененный тканевый тропизм РКВС. О подобных изменениях фенотипа сообщалось относительно мелкобляшечного варианта ВИГС (119). Хотя ген S мелкобляшечного варианта и дикого ВИГС похожи, большая делеция (462 нуклеотида), происходящая из S - гена, имеет место в мелкобляшечном варианте (115а). Эта делеция выявляет открытую рамку считывания одного потенциально кодируемого белка и N-концевую часть второго потенциального вирусного белка. Очевидно, патогенность РКВС и мелкобляшечного варианта ВИГС снижается как результат этих генетических делеций.

Нуклеотидная последовательность S-гена вируса инфекционного перитонита кошек (ВИПК) определена и сравнивалась с таковой S-гена ВИГС (64а). На основе нуклеотидной и аминокислотной гомологии идентифицированы 2 различающихся домена. Один домен (аминокислоты 1-274) имел нуклеотидную гомологию 39%, тогда как гомология во 2-ом домене (аминокислоты 275-1447) была 93%. Возможная эксплантация для этих высоких дивергенций последовательности в 3' конце может быть такой, что ВИПК происходит при рекомбинации РНК-РНК ВИГС со связанным вирусом. Высокая частота РНК-РНК - рекомбинации также описана и для коронавирусов мышей (76).

Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу и дезоксихолату натрия, устойчив к трипсину. Не подавляется ДНК-ингибиторами. Инактивируется 0,03%-ным р-ром формалина, 1%-ным Lysovet (смесь фенола и альдегида), 0,01%-ным р-ром p-пропио лакто- на, гипохлорита натрия, едкого натрия, йода (31). Изучена сравнительная термическая инактивация 2-х штаммов вируса инфекционного гастроэнтерита Perdue и Д25. Возбудитель устойчив к замораживанию. В замороженном виде вируссодержащий материал сохраняется 5- 8 нед, при -18°С - до 18 мес, при -20, -40 или -80°С - 365 дн; при нагревании до 56°С инактивируется за 30 мин и до 50°С в присутствии 1М MgCb - за 1 ч, при 37°С полная потеря инфекционности наступала через 4 дн.

Антигенная структура. Сердцевина ВИГС представлена геномной РНК с ковалентно связанным и фосфорилированным нуклеокапсидным белком (N) с мол.м. 47 кД. Вокруг неё располагается ведущий свое происхождение из эндоплазматического ретикулума клеток хозяина липидный белок, в котором локализованы вирусспецифические липопротеины 2-х типов: интегральный мембранный липопротеин (М) с мол.м. 28 кД и пепломерный гликопротеин (S) с мол.м. 200 кД, который формирует поверхностные отростки (пепломеры). В вирусе ТГС выявлены 4 АГ-сайта (А, В, С и D) и идентифицировано 11 эпитопов, 8 из которых вируснейтрализующие.

Нейтрализующие вирус ТГС монАТ против gpS не зависят от комплемента (117), тогда как АТ против гликопротеина М тоже нейтрализуют вирус ТГС, но исключительно в присутствии комплемента. ВНА к S- и М-белкам свидетельствуют об АГ гетерологичности изолятов вируса ТГС (121). У коронавирусов свиней и собак в протективном белке обнаружено, по крайней мере, одна общая АГ-детерминанта, обеспечивающая практически одинаковую защиту поросят при иммунизации матерей гомо- и гетерологичным вирусом (120). По более ранним сообщениям вирионы ТГС содержат следующие белки: пепломерный белок Е2 (220 кД), белок Е'2 (175 кД), который является предшественником белка Е2, низкомолекулярный оболочечиый белок El (29 кД), нуклеопротеин N (47 кД). Сыворотка реконвалесцентов содержит ПА к S и М протеинам, часто к вирус-кодируемому внутриклеточному протеину мол.м. 14 кД (115). МонАТ получены к аттенуированному (38, 43, 66, 71) и вирулентному штаммам ВТГС (113, 121) и используются для характеристики протеинов вируса и карты эпитопов, которые выявляют АТ. Главные нетрализующие детерминанты связаны с S гликопротеином; эти эпитопы высококонсервативны у большинства штаммов ВИГС (51, 52, 66, 71, 113). Антигликопротеин-М монАТ обладают низкой нейтрализующей активностью или она полностью отсутствует, однако, она может быть значительно увеличена комплементом (71Ь, 117). Использование нейтрализующих монАТ для определения эпитопной карты S- гликопроте-ина показало наличие 4-5 различных АГ-сайтов, содержащих в сайтах А и В высоко консервативные эпитопы, узнаваемые сильной нейтрализацией монАТ (38, 43, 51, 52,102). В 2-х последних работах положение каждого из 4-х главных АГ-сайтов (А-D) картировано на первичной структуре гликопротеина S.

Антигенная вариабельность. Штаммы вируса, выделенные от животных в разных странах, серологически идентичны, хотя в последние годы появились варианты. Существует иммунологическое различие между кишечным и культуральным ВИГС. Кишечный вирус содержит АГ А. В 1977 г. установлено АГ-родство ВИГС с ВИПК, а также коронавирусом собак (КВС). Вирус ИГС имеет 1 серотип, не имеет связей с вирусом энзоотической диареи свиней и ГА-вирусом свиней (41). Вьщеленный недавно респираторный коронавирус свиней (RSCV/PKBC), получивший широкое распространение в ряде западноевропейских стран, оказался в АГ-отношении тесно родственным ВИГС. Главным отличием его является исключительный пневмотропизм при отсутствии энтеропатогенности (65). В АГ-отношении оба вируса сходны между собой и имеют одинаковые нейтрализующие эпитопы во всех ви- рионных белках (N, S, М). Однако монАТ, специфичные к белку S ВИГС, распознают РКВС (88, 89). Вирус эпизоотической диареи свиней по всем свойствам является типичным коро- новирусом, хотя и не обладает АГ родством с другими представителями семейства коронавирусов (47, 89). Исследована степень родства ВИГС и РКВС по уровню индукции специфических реакций клеточного иммунитета и защиты против контрольного заражения поросят. ВИГС не имеет АГ родства с 2-мя другими коронавирусами свиней: ГА-вирусом энцефаломиелита (PEDV) и вирусом эпидемической диареи поросят (CV777) (90). Энцефалит, обусловленный Г A-вирусом, регистрируется в Европе и на Тайване, АТ выявлены на ограниченном поголовье взрослых свиней в США (42). ВИГС, КВС и ВИПК АГ связаны (97, 118). Подтверждено, что эти 3 вируса могут представлять ряд мутантов исходного вирусного штамма (62). Перекрестная реакция имеет место также на уровне структурных белков S, N и М в реакциях радиоиммунопреципитации, иммуноблотинга, ИФА (62). Аналогичные перекрестные реакции со структурными белками ВИГС и РКВС наблюдали с использованием поликлональной сыворотки в иммуноблотинге (34).

Локализация вируса. В клетках тонкого кишечника заражённого поросёнка вирус размножается в течение 2 нед, а с калом выделяется 7-10 дн после клинического выздоровления. В достаточно высокой концентрации он накапливается в эпителии тонкого кишечника, содержимом ЖКТ и ткани лёгких. Вирус, попавший в организм с кормом, благодаря кисло- тоустойчивости проходит в желудок и размножается в тонком кишечнике, разрушая эпителий ворсинок. Другие клетки не повреждаются. Вирус локализуется в цитоплазме цилиндрических клеток ворсинок тонкого кишечника. Поражённые клетки обнаруживают уже через 5 ч после заражения. Через 9-12 ч происходит повторный цикл его репликации, и через 16- 18 ч в большинстве клеток отмечают специфическую ИФ. Через 24 ч происходит атрофия ворсинок, а спустя 3 дня - регенерация клеток, которая завершается на 7-й день.

Больные и переболевшие свиньи являются вирусовыделителями до 2 мес. Концентрация вируса в экскрементах особенно высока в начале болезни и в период её развития (106-107 ИДбо/мл)- В крови и паренхиматозных органах его обнаруживают в продромальный период при первом повышении температуры тела. При развитии виремии он выявляется в паренхиматозных органах, а также в слизистой носа, трахеи, миндалинах, в более низком титре - в крови. У взрослых свиней вирус редко обнаруживают в органах пищеварения и дыхания, а также в региональных лимфоузлах. В лимфоцитах он не реплицируется. При экспериментальном заражении 3-дн поросят на 2-е сут после инокуляции вирус выделяют из лёгких, печени, поджелудочной железы, а также крови. В последующие 9 дн титр его ещё высокий, но к 15-му дню его в органах уже не обнаруживают. У 3-нед поросят вирус выделяют только из кишечника в течение 3-5 дн после заражения. Однако при заражении новорождённых поросят per os или интраназального вирус реплицируется в слизистой оболочке носа, миндалинах и тонком кишечнике, затем передвигается по нервным путям в перефирические ганглии и появляется в нейронах спинного и головного мозга. У поросят, полученных с помощью гистеректомии от экспериментально заражённых свиноматок на 74-й и 95-й дни супо- росности, обнаруживали кишечную локализацию вируса и атрофию ворсинок кишечника. Поросята имели АТ к вирусу ВИГС. Недостаток цинка в корме отягощает болезнь.

Из организма больного животного вирус выделяется, в основном, с калом и в меиьшей степени с мочой и экскретами. Во внутренних органах и лимфоузлах животиых- реконвалесцентов он может переживать многие месяцы и годы. Равновесие вирус - хозяин может быть нарушено стрессовыми воздействиями. Поросята, заражённые в возрасте 5 иед, оставались вирусоносителями в течение 104 дн. Установлено, что заражение супоросных свиноматок за 2-3 нед до опороса приводит к массовому заболеванию и высокой смертности их поросят. При заражении маток за 1,5-2 мес до опороса поросята остаются здоровыми в течение всего подсосного периода. После отъёма от матерей они легко переболевают, смертность незначительная. У экспериментально заражённых поросят наблюдали вирусоио- сительство в течение 2,5 мес (срок наблюдения).

Антигенная активность. Вирус ИГС обладает выраженной АГ активностью и индуцирует синтез ВНА, активность которых обусловлена IgA, а при иммунизации - IgG. У свиней, заражённых per os вирулентным шт. Miller, появлялись AT IgA, а у заражённых парентерально аттенуированным культуральным шт. Purdue- IgG. Вирусный нуклеопротеин (N) не способен индуцировать синтез ВНА (117). В молозиве, а затем в молоке свиноматок- реконвалесцентов, такие АТ присутствуют в течение нескольких недель. Поросята от переболевших или ранее инфицированных в естественных условиях свиноматок устойчивы к заболеванию, если они сразу после рождения и не реже, чем через каждые 4 ч потребляют такое молозиво или молоко. Пассивный иммунитет против кишечной инфекции обусловлен IgA молока. Титры АТ в молозиве и молоке инфицированных свиноматок выше, чем в сыворотке крови. Значительный уровень IgA обнаруживается в молозиве и молоке только после поедания свиноматками вируссодержащего материала. Возможный механизм, объясняющий это явление; - АГ-сенсибилизированиые иммуноциты из Lamina propria кишечного тракта заселяют молочную железу. Субъедииичный компонент ВИГС (гликопротеии), будучи выделенным из вирионов с помощью ультразвука и отделенным из остальных вирусных компонентов (с помощью изопикнического центрифугирования), способен при внутримышечном введении защищать поросят. У вакцинированных животных развивался гуморальный иммунный ответ (53, 53а). Главным механизмом нейтрализации является ингибиция прикрепления вируса к клетке (108).

Экспериментальная инфекция. Вызывается введением вируса per os или интрана- зальио. Наиболее восприимчивы поросята - сосуны в возрасте от 1 до 15 дн, хотя во многих случаях болезнь удаётся воспроизвести и у взрослых животных. Заражение легко удаётся только при введении материала per os. Поросят 1-5-дн возраста можно заразить иитраиа- зально; очевидно, что при интразанальной инстилляции материала около 90% его попадает в ЖКТ. При парентеральных методах заражения воспроизвести болезнь обычно не удаётся или требуются для этого в 1000 раз большие дозы вируса, чем при оральном инфицировании. Морские свинки, белые мыши и мышата-сосунки 1-5-дн возраста, кролики, хомячки к ВИГС нечувствительны.

Культивирование. Вирус размножается в первичных культурах клеток тестикул, кожи, лёгких, ЩИТОВИДНОЙ железы, тощей, ПОДВЗДОШНОЙ КИШОК, эпителии СЛИЗИСТОЙ оболочки НОСОВОЙ полости и в перевиваемых клетках тестикул поросёнка, не вызывая в первых пассажах ЦПД, а также в органных культурах пищевода. Редко полевые изоляты вызывают деструкцию клеток в первом пассаже; ЦПД появляется лишь после предварительной адаптации вируса. Адаптированный к культуре клеток, он быстро размножается и разрушает их в течение 2-4 дн, в зависимости от дозы. Вирус хорошо культивируется в суспензионной культуре линии клеток почки поросенка ППК-666. Эта культура оказалась высокопродуктивной системой для крупномасштабного производства вакцинного штамма ВИГС (15). Степень стимуляции репродукции коронавируса КРС трипсином различна в зависимости от культуры клеток, тогда как коронавирус свиней в присутствии трипсина накапливается в высоком титре (108-109 ТЦД50/ИЛ) в 2-х постоянных линиях клеток свиней (СПЭВ и ППС). Максимальные титры инфекционности при культивировании шт. “Правда”, ВГНКИ №5 и V-91 в монослойной культуре клеток ППС составляли 106 ТЦД5С|/ил, тогда как при выращивании в суспензии эксплантатов кишечника и легких плода свиньи достигали 106,5-107,5 и Ю8,0 ТЦД50/МЛ соответственно (11,12).

Для выделения вируса наиболее пригодны культура клеток щитовидной железы свиньи и перевиваемая линия РК-15. ВИГС интерферирует с вирусом ВД-БС и ВБА. ЦПД вируса начинается с развития малого или большого синцития уже через 24 ч после инокуляции. В последствии мелкие синцитии сливаются и поражённые клетки отделяются от поверхности стекла. Большой синцитий с 20-40 ядрами можно наблюдать при заражении культуры клеток из щитовидной железы свиней, в то время как синцитий, обнаруживающийся в культуре клеток из почек свиней, чаще всего содержал 2-5 ядер, редко - больше. Тельца-включения не обнаруживались ни в цитоплазме, ни в ядре. В культуре клеток почки свиней ЦПИ менее выражены. Почти все изоляты вируса в первично-трипсинизированной культуре клеток щитовидной железы свиньи индуцируют образование бляшек, размеры которых колеблются от 1 до 5 мм в диаметре. Свежевыделенные изоляты индуцируют более мелкие бляшки, чем лабораторные штаммы. Бляшки образуются и в перевиваемой линии клеток семенников свиней. В монослойной культуре клеток щитовидной железы взрослой свиньи при pH 6,5 титр вируса в 10 раз выше, чем при pH 7,2, и в 100 раз выше, чем при pH 8.

Отмечены различия при культивировании ВИГС и КВС in vitro. Оба вируса размножались в культуре клеток почек собак (97) или перевиваемой линии клеток кошек (118). Вирусы ИПК и КВС не репродуцировались в клетках ST или культуре клеток щитовидной железы поросят, тогда как ВИГС в обеих культурах изолировался (97). В альвеолярных макрофагах репродуцировался только адаптированный к культуре клеток не вирулентный ВИГС (70). АГ ВИГС обнаруживается в цитоплазме МФА через 4-5 ч после заражения. Зрелые вирионы встречаются в цитоплазме почкующимися из цитоплазматического ретикулюма и вирусные частицы (диаметром 65-90 нм) часто наблюдаются в цитоплазматических вакуолях. Вирус виден прилегающим к мембране клетки-хозяина после выхода из зараженной клетки. Гликопротеины вируса идентифицируются на поверхности тестикулярных свиных клеток (72).

Гемагглютинирующие свойства. Установлена ГА активность вируса в отношении эритроцитов цыплят, морских свинок и КРС. Однако только вирус, размноженный в культуре клеток ППС, обладал ГА-активностью, не влияющей на иммуногенность. Не установлено разницы в индукции ВНА и выраженности протективного иммунитета при использовании ГА и не ГА вируса. Г А активность коронавирусов связана с 4-тым структурным белком НЕ (ГА эстероз). ВИГС не имеет НЕ-гликопротеина. ГА активность ВИГС зависит от системы его репродукции и связана с пепломерным гликопротеином. При размножении вируса в перевиваемых линиях клеток IBRS и щитовидной железы свиней вирус агглютинирует эритроциты морской свинки в титрах 1:64 и 1:256 (9, 10).

В цитоплазме клеток свиней, заражённых ВИГС, обнаруживают ферментативную активность, которая отсутствует в нормальной культуре клеток и не обнаруживается в очищенных вирионах. Для проявления ферментативной активности требуются ионы Mg2+.