ОТБОР И ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ КРОВИ К АНАЛИЗУ

Взятие образцов крови. Небольшое количество крови для общего анализа берут из сосудов внутренней или наружной поверхности ушной раковины. У собак, кошек, пушных зверей кровь берут из латеральной подкожной вены предплечья или голени, лапки (пальца), кончика хвоста; у кур — из гребня или сережки, вен внутренней поверхности крыла; у уток и гусей — из ступни конечности или большой плюсневой вены.

У моногастричных животных кровь берут до кормления в утренние часы, у жвачных животных — утром через 4 ч после кормления. Время кормления существенно влияет на содержание в крови липидов, сахара, холестерина и некоторых других показателей. Чрезмерное возбуждение животного во время взятия крови (стресс) влияет на показатели кислотно-щелочного равновесия, сахара, многих гормонов, количество эозинофилов и лимфоцитов. Во многом биохимические показатели крови зависят от фармакологических препаратов, токсических веществ, испорченных кормов. Все эти факторы должны быть учтены при отборе проб крови.

Клинические лабораторные исследования. Исследуют цельную кровь, плазму и сыворотку. Проводят общий гематологический анализ цельной крови, а также определяют содержание в ней сахара, кетоновых тел, меди, цинка, кобальта, марганца, селена и др.

В плазме крови определяют резервную щелочность, содержание натрия, калия, хлора, кальция, магния, мочевины, билирубина, АсАТ и АсАТ, креатинкиназы, витаминов А, С, в сыворотке крови — общий белок и его фракции, мочевину, мочевую кислоту, креатин, свободные аминокислоты, липиды, холестерин, билирубин, кальций, фосфор, ферменты, белково-осадочные пробы и др.

В зависимости от характера исследований готовят одну или две пробирки.

предварительно вносят одно из противосвертывающих средств (антикоагулянт).

В качестве антикоагулянта используют гепарин (20 ИЕ/мл или 2—3 капли 1%-ного раствора на 10 мл крови); ЭДТА (этилендиа- минтетрауксусная кислота): натрия (На2ЭДТА), калия (К2ЭДТА, К3ЭДТА) — 1,5 мг/мл или 3—4 капли 10%-ного раствора на 10 мл крови; цитрат натрия (ИазСбЬ^Оу) — 1,5—2 мг/мл крови (используют только при исследовании СОЭ); оксалат натрия (Иа2Са02) — 3 мг на 1 мл крови (используют при подсчете количества клеток крови и исследовании их морфологии). Высыхание в пробирке дозированного раствора оксалата должно происходить при температуре не выше 80 °С. Передозировать антикоагулянты нельзя, так как высокая их концентрация вызывает в крови различные изменения, вплоть до гемолиза. Бели кровь берут из сосудов сразу в меланжер (смеситель) или капилляр гемометра Сали, то антикоагулянт не используют.

В пробирки, предназначенные для получения плазмы крови, в которых предусмотрено определение резервной щелочности, кроме антикоагулянта добавляют по 0,5 мл вазелинового масла. Добавление гепарина не благоприятствует определению в крови электролитов, аммиака, натрия оксалата и цитрата — pH, кальция электролитов: ЭДТА-кальция и других, остаточного азота. Пробирки с раствором натрия цитрата или оксалата перед использованием высушивают при температуре не выше 80 °С.

Кровь в пробирки набирают по стенке во избежание гемолиза. В лабораторию ее доставляют в день взятия в термосе. При отправке в лабораторию не допускают замораживания или сильного охлаждения крови, так как это приводит к гемолизу.

В лаборатории кровь в пробирке для отделения сыворотки обводят тонкой спицей из нержавеющей стали и ставят в термостат при температуре 37—38 °С на 1 ч. Между взятием крови и получением сыворотки должно быть не более 5 ч. Отделившуюся сыворотку сливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 10 мин, при 3000 мин 1 (об/мин).

Общий клинический анализ крови, определение в крови сахара проводят в день ее взятия, другие анализы обычно заканчивают в течение 1—3 дней. Для подсчета форменных элементов крови ее берут из капиллярных сосудов.

Кровь с антикоагулянтом хранят в закрытых пробирках в течение

24. ч при 2—8 °С, при комнатной температуре (15—20 °С) — 8 ч.

Основные требования к подбору материала, выбору антикоагулянта, условиям хранения образца крови и срокам анализа приведены в таблице 3.

3. Материал для исследования, аитикоагулянт, условия хранения образца, сроки анализа

Обозначения: ЦК — цельная кровь; ПК — плазма крови; СК — сыворотка крови.

Наборы реактивов. При лабораторных исследованиях используют как отдельные реактивы (ч. д. а., х. ч.), так и их наборы. Для лабораторных анализов выпускают наборы реактивов заводского изготовления, снабженные инструкцией. При использовании их повышается гарантия качества выполняемых лабораторных исследований. При определении содержания гормонов, опухолевых маркеров, использовании автоанализаторов применяют только наборы реактивов заводского изготовления. К ним предъявляют определенные требования, в частности, срок хранения набора при определенных условиях (например, в холодильнике) должен быть не менее 6 мес со дня выпуска. Стабильность рабочих растворов, если возможно, должна сохраняться 1 нед, но не менее чем в течение рабочего дня. Качество реактивов должно быть гарантировано.

Большинство наборов реактивов предназначены для определения одного показателя, но имеются и такие, с помощью которых в биологической жидкости можно устанавливать 2 вещества и более (например, холестерин и мочевую кислоту).

В лабораторной практике широко применяют другие готовые аналитические формы — диагностические полоски, изготовленные на принципах «сухой химии». Они предназначены для качественного, полуколичественного и количественного определения биохимических компонентов в биологических жидкостях. В диагностических полосках все реагенты в твердой фазе нанесены на подложку в необходимом количестве. Нанесенные на подложку химические реагенты вступают в реакцию с исследуемым веществом в растворителе, которым является биологическая жидкость. Фирмы «Лахема» (Чехия»), «Рош Диагностике», «Мерк» (Германия), «Ames» (США) и др. выпускают экспресс-тесты в виде мо- но- и политестов для исследования в моче pH, кетонов, глюкозы, белка, билирубина, уробилиногена, эритроцитов, гемоглобина, нитратов, удельного веса; в крови — мочевины, глюкозы, псевдо- холинэстеразы. Для количественного определения биохимических показателей с использованием системы «сухой химии» разработаны измерительные приборы — специальные фотометры, флюоресцентные спектроскопы и др. Так, фирма «Эймс» (США) выпускает комплект «Серолайзер», позволяющий определять в крови (сыворотке) гемоглобин и некоторые другие показатели. Фирмой «Рош Диагностике» (Швейцария) разработаны отражательные фотометры и диагностические полоски для определения различных показателей крови. Например, система «Рефлотест» позволяет определять в субстратах количество глюкозы, мочевины, билирубина и его фракций, креатинина, белка, триглицеридов, холестерина, альбумина, активность АлАТ, АсАТ, ЛДГ, КК, гамма-ГТ, липазы, щелочной фосфатазы, ионов (фосфора, кальция, аммиака), а также некоторых лекарств (фенобарбитала, теофиллина и др.).

В качестве диагностических полосок применяют многослойные пленки, в которых в качестве подложки используют негнущийся пластик или другой подобный материал. Многослойные пленки, объединенные в слайд, были впервые разработаны фирмой «Кодак» (США). Система «Кодак Эктахем» объединяет слайды и прибор, позволяющие определять в сыворотке крови более 20 биохимических компонентов. Фирма «Optho-Clinical Diagnostics France» (США) выпускает систему «VITROS» для экспресс-диагностики электролитов, ферментов, липидов и иммунодиагностических исследований в моче и сыворотке крови.

Для количественного определения веществ с низкой молекулярной массой (дишстин, фенитоин, фенобарбитал) используют иммуноферментный тест на основе конкуренции.

Недостатками систем «сухой химии» являются высокая стоимость анализа, зависимость выбора метода от производителя, возможность интерференции лекарств.

Источник: 27.