РАЗБАВЛЕНИЕ СПЕРМЫ

Для разбавления спермы используют специальные среды, создающие следующие преимущества:

получается большой объем спермы, что имеет важное практическое значение для интенсивного использования ценных производителей;

в сперме, смешанной с некоторыми разбавителями, спермии переходят из активного в анабиотическое состояние;

удлиняется срок переживаемости спермиев вне организма вследствие замены секретов придаточных половых желез искусственной средой и ослабления концентрации в сперме токсических веществ, бактериостатического действия добавляемых в разбавитель антисептиков и других веществ.

Перед разбавлением эякулята определяют подвижность и концентрацию спермиев. Эти показатели должны удовлетворять требованиям инструкции, поскольку они являются основой для определения степени разбавления, которая выражается отношением, показывающим объем среды, добавляемой на каждый миллилитр эякулята, и имеет определенные пределы у каждого вида производителей (табл. 7). Предельную степень разбавления спермы можно вычислить по формуле

Ср = 1: (С • Пэ • По ¦ 0,01 ¦ Од :

: КСппд -1,2 — 1),

где Ср — предельная степень разбавления эякулята; С — концентрация спермиев в разбавляемом эякуляте, млрд/мл; Пэ — подвижность спермиев в эякуляте, баллы; По — минимально допустимая подвижность спермиев перед осеменением, баллы; 0,01 — поправочный коэффициент подвижности спермиев; Од — объем дозы разбавленной спермы, мл; КСппд — минимальное количество спермиев с прямолинейным поступательным движением в дозе, млрд; 1,2 — поправочный коэффициент для КСппд.

Эякулят разбавляют, добавляя по частям необходимое количество разбавителя и тщательно перемешивая жидкость. Обычно сперму быка разбавляют в 10 (1 : 9)—15 (1: 14) раз. В некоторых странах разбавляют сперму 1 : 20 : 25 : 50. Отдельные специалисты рекомендуют разбавлять сперму быка 1 : 100 и даже 1 :200.

Состав сред меняется в зависимости от вида животных и способа хранения спермы. Разбавляют эякулят не позднее чем через 30 мин после его получения.

Впервые для разбавления спермы И. И. Иванов использовал физиологический раствор хлорида натрия (0,9%-ный). Однако он оказался малопригодным для этой цели, так как его вязкость меньше вязкости спермы, поэтому спермии в ней быстро оседают: pH физиологического раствора колеблется в пределах 5,6—6,2 и даж е ниже, так как дистиллированная вода погло7. Минимальные показатели спермы, допускаемой к разбавлению и хранению, и степень ее разбавления

щает из воздуха углекислоту.

К. Н. Кржишковский и Г. Н. Павлов (1927) установили важность включения в разбавитель лецитина и желтка куриного яйца для выживаемости спермиев. На основе этого с первой половины XX столетия широкое распространение получили глюкозоцитратно-желточные среды.

В настоящее время для краткосрочного хранения спермы применяют разные среды (табл. 8).

Все компоненты для приготовления разбавителей должны быть химически чистыми, проверенными на токсичность и соответствовать ГОСТу, указанному в инструкции по искусственному осеменению. Компоненты хранят в сухом темном месте в плотно закрытых банках. Биологический контроль обязателен для новой серии каждого препарата, особенно антибиотиков, добавляемых в среду, так как некоторые из них могут оказаться губительными для спермиев. Разбавители необходимо готовить только на дистиллированной воде. В ней нет хлористых соединений, разрушающих оболочку спермиев.

Глюкоза, фруктоза, лактоза, сахароза и гликокол (аминоуксусная кислота) снижают электропроводность раствора, предупреждая агглютинацию спермиев, связанную с потерей ими электрических зарядов. Глюкозу и фруктозу спермии могут использовать как источник энергии.

В сперме быка и барана при хранении начинают образовываться молочная кислота и другие продукты обмена. Для их нейтрализации, задержки набухания коллоидов цитоплазмы, оболочки спер-

миев, уменьшения их проницаемости вводят в состав разбавителей лимоннокислый натрий (цитрат), являющийся естественным буфером спермы (его pH 7,8—8,0).

Один из первых факторов внешней среды, действующих на свежую сперму, — температура. При ее понижении (особенно ниже 18 °С) спермии подвергаются температурному шоку и гибнут. Для ослабления шока в разбавитель вводят желток куриного яйца, содержащий около 7 % неокисленного лецитина. Он одновременно является питательным веществом, предохраняющим расходование липидов цитоплазмы спермиев. Яйца должны быть обязательно свежими, с ярко окрашенным желтком, получены от здоровых кур, которым предоставляют полноценные корма и достаточное движение. В хорошем яйце содержатся полный набор незаменимых аминокислот, углеводы, жироподобные вещества, пигменты, микроэлементы, витамины. Яйца с загрязненной скорлупой негодны. На поверхности скорлупы выявляли до 13 видов микробов и 7 видов плесневых грибов. Поэтому перед использованием яиц скорлупу их необходимо облучать бактерицидными лампами или протирать спиртовыми тампонами.

Зарубежные ученые обнаружили в сперме быка белок семиналплазмин, сила действия которого на микрофлору соответствует пенициллину, стрептомицину или тетрациклину. При разбавлении эякулята концентрация семинал- плазмина снижается и соответственно уменьшается его защитное действие. Для предупреждения отрицательного действия микробов на спермиев в среду добавляют пенициллин, стрептомицин и белый растворимый стрептоцид или смесь из перечисленных препаратов, выпускаемую под названием «спермо- сан-3», в рекомендуемых дозах (см. табл. 8 и 10). Опыты показали, что добавление в среду стрептоцида положительно сказывается на жизнеспособности спермиев, но не приостанавливает рост микробов. Пенициллин задерживает рост микробов, но не повышает оп- лодотворяемости. Стрептомицин, угнетая рост микробов, в больших дозах отрицательно влияет на спермиев.

Имеются работы, свидетельствующие о нецелесообразности введения каких-либо антибиотиков в сперму.

Некоторые авторы предлагают вводить в среды для спермы хряков и быков окситоцин, карба- холин и другие препараты для усиления моторики матки и повышения оплодотворяемости самок. Специальные исследования показали, что добавление окситоцина или карбахолина к разбавленной сперме не оказывает никакого эффекта на продвижение спермиев в половых органах свинок, а также на их оплодотворяемость. Окситоцин усиливает перистальтические, а не антипери- стальтические сокращения матки, способствующие передвижению спермиев. Нецелесообразно вводить в среду для спермы хряка в качестве загустителя поливиниловый спирт, он снижает эффективность искусственного осеменения.

Среду нужно готовить с учетом того, что ее компоненты делятся на термоустойчивые, которые можно стерилизовать физическими методами (кипячение, автоклавирование), и термочувствительные (желток куриного яйца, глицерин, спермосан), не подвергаемые стерилизации. Сначала растворяют в воде термоустойчивые компоненты и 10 мин стерилизуют в кипящей водяной бане. Остужают до 30—35 °С и добавляют термочувствительные компоненты. Затем среда находится при указанной температуре не более 4 ч в водяной бане или термостате. Остатки неиспользованных сред выбрасывают.

Перед разбавлением среда и сперма должны быть одинаковой температуры.

Дляоценки качества сре- д ы на чистое предметное стекло помещают каплю проверенной на активность спермы и к ней добавляют 2—3 капли среды, пробу накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Понижение активности спермиев — свидетельство непригодности, а отсутствие заметных изменений в сперме служит основанием для использования разбавителя.

Хороший разбавитель для спермы быка, жеребца, хряка и других производителей — свежее молоко. Как показали исследования Н. Н. Михайлова, молочная среда обладает большой буфернос- тью, понижает степень раздражения спермиев, увеличивает вязкость разбавленной спермы и имеет концентрацию водородных ионов (pH), сходную с маточной слизью.

Из многочисленных сред для разбавления и хранения спермы хряков при температуре 16—20 °С в настоящее время используют глюкозохелатоцитратную и глюкозохелатоцитратносульфатную. Один из основных компонентов этих сред — хелатон (двунатриевая соль эти- лендиаминтетрауксусной кислоты, С1оН1408№2М2). Н. Т. Плишко установил, что хелатон, снижая обменные процессы в сперме, увеличивает срок переживаемое™ спермиев и предохраняет их акросому и оболочку от разрушения. Он тормозит размножение микробов, а на некоторые из них оказывает бактериоли- тическое действие. Наибольшая переживаемость спермиев хряка отмечается при разбавлении спермы 1: 3. Уменьшение и увеличение степени разбавления снижают переживаемость спермиев.

При осеменении свиней фракционным методом А. В. Квасницкий предложил ряд сред, назначение которых — заполнить полости рогов матки, поэтому их называют заполнителями: глюкозосолевой (30 г глюкозы и 4,5 г №С1 на 1 л дистиллированной воды); солевой (9 г ТЧГаС! на 1 л дистиллированной воды); молочный (свежий обрат). Эти заполнители оказывают на слизистую оболочку матки более благоприятное действие, чем желточно-цитратные и другие разбавители.

В Болгарии (Братанов, Иосифов, Стоянов) предложен медовый разбавитель для спермы жеребца, быка и барана. Авторы установили, что 7%-ный водный раствор меда очень благоприятно действует на спермиев. Добавление в разбавители для спермы быка и барана фосфатов и сульфатов улучшает их качество. Авторы не рекомендуют пользоваться медом с горьким вкусом.

Есть много сообщений о применении самых разных разбавителей. Во всех случаях приготовления и использования сред для спермы необходимо строго руководствоваться действующей инструкцией по искусственному осеменению соответствующего вида животных.