Иммуноблоттинг

  Иммуноблоттинг (Вестерн блоттинг) является высокочувствительным способом исследования белков и применяется для диагностики фитопатогенных микроорганизмов и вирусов по их белковым антигенам. Он объединяет два метода анализа протеинов — электрофорез и иммунодетекцию с помощью антител.

Такая комбинация обеспечивает высокую разрешающую способность метода за счет электрофоретического разделения белков и обнаружения среди них антигена(ов) с помощью гомологичных антител или антисывороток. При соблюдении оптимальных условий анализа, используя иммуноблоттинг, в образце удается обнаружить менее 1 нг целевого антигена.
Принципиально, методика проведения иммуноблоттинга включает три следующих стадии. Сначала анализируемые белки разделяют в полиарила- мидном геле с ДСН. После этого их можно окрасить и сравнить с эталоном, если таковой имеется, или с маркерами молекулярной массы. Затем на гель помещают нироцеллюлозную мембрану, перенос белков на которую происходит за счет диффузии или с помощью электроблоттинга. Далее следует нанесение меченных ферментом mABs, pABs, антител без ферментной метки, или просто гомологичной антисыворотки (в двух последних случаях для обнаружения связавшихся антител применяют антивидо- вые конъюгаты) и проведение ферментативной реакции. Таким образом, заключительная стадия иммуноблоттинга фактически является вариантом твердофазного ИФА.
Вестерн блоттинг позволяет обнаружить индивидуальный белок в смеси, содержащей множество других белковых веществ. С его помощью идентифицируют вирусы, содержащиеся в растительных экстрактах, и устанавливают их наличие в клетках насекомых-переносчиков. Например, иммуноблоттинг оказался подходящим методом для обнаружения и идентификации вирусных возбудителей в пораженных растениях пшеницы, кукурузы, чеснока и винограда как при индивидуальной, так и при смешенной инфекции.
Следует, однако, иметь в виду, что в результате электрофореза с ДСН получают белки в денатурированном состоянии, которые не распознаются антителами, специфичными к нативным белкам. Но если в распоряжении исследователя имеются антитсыворотки против входящих в состав белков пептидов, метод может быть использован для выявления серотипов у вирусов растений и установления степени родства между их штаммами.

               

Еще по теме Иммуноблоттинг:

1. Портал "ПЛАНЕТА ЖИВОТНЫХ". Кто ты, собака?, 2010
2. Любопытное доказательство того, что собаки очень давно одомашнены, приводит советский ученый-языковед академик Н. Я. Марр...
3. Антропологи изучают кости и скелеты людей очень далекого прошлого, изучают их близких и отдаленных родственников — ископаемых и современных обезьян,— чтоб восстановить путь, который прошел человек в своем развитии.
4. Находки, проливающие свет на происхождение собак, имеют возраст 8—10 тысяч лет...
5. Значит, собака пришла сюда вместе с человеком?..
6. Находка Савенкова произвела сенсацию...
7. КАК ЭТО МОГЛО СЛУЧИТЬСЯ!
8. Люди не очень опасались волков, волки же не очень боялись людей и нередко подходили к стоянкам первобытного человека достаточно близко.
9. Видимо, много, очень много лет жили люди и волки на расстоянии, очень медленно сближались и очень трудно понимали выгодность сближения...
10. Среди ученых нет единого мнения, ради чего была приручена собака...
11. Но могло быть и иначе.
12. Волки жили стаями...
13. Cуществует еще одна гипотеза, объясняющая появление волков среди людей...
14. ПОЧЕМУ ЭТО МОГЛО СЛУЧИТЬСЯ!
15. Как относились к животным наши далекие предки?..
16. "УМОМ СОБАКИ ДЕРЖИТСЯ МИР"
17. Считается, что первую научную классификацию пород собак сделал знаменитый французский натуралист Бюффон...
18. Первое место на изображениях занимают охотничьи собаки...
19. Современные ученые считают, что культ животных в Египте развился на тотемической основе.
20. В Америке, как считают ученые, собаки не одомашнивались...