ВЫЗЫВАНИЕ СУПЕРОВУЛЯЦИИ

Теоретические исследования и опыт проведения пересадок зародышей в производственных условиях показали, что для широкого распространения этого метода в практике необходимы надежные источники получения оплодотворенных яйцеклеток или зародышей на ранних стадиях развития.

В решении данной задачи имеются два принципиальных подхода. Первый подход — это обеспечение множественной овуляции, или полиовуляции, у коров, ремонтных телок и у молодых тело- чек до наступления половой зрелости; второй подход, находящийся пока в стадии разработки, — изыскание способов извлечения яйцеклеток непосредственно из яичников с дальнейшим созданием условий для их созревания и оплодотворения in vitro. В настоящее время в практике используется в основном первый способ. Животным, обычно в середине полового цикла, вводят препараты гонадотропных гормонов, вызывающих усиленный рост и развитие многих пузырчатых фолликулов и их овуляцию на фоне обратного развития желтого тела.

Суперовуляцию считают достигнутой, если произошло выделение не менее трех яйцеклеток (в отдельных случаях у животных иховулирует 100 и более). Однако основная цель гормональной обработки — получение в результате суперовуляции 10—20 яйцеклеток.

У коров и телок для вызывания множественной овуляции применяют гонадотропины гипофизарного и плацентарного происхождения; для обработки используют разнообразные схемы. Наиболее эффективны гонадотропины сыворотки жеребых кобыл (ГСЖК). Они вырабатываются в оболочках плода особыми клетками, которые внедряются в эндометрий кобылы примерно с 36-го по 40-й день беременности. Гонадотропины выделяются в кровь матери. Наиболее высокое содержание ГСЖК в крови кобыл отмечается примерно с 60-го по 90-й день беременности. Гонадотропины СЖК лучше всего применять в середине полового цикла: с 8-го по 15— 16-й день. Препараты вводят однократно в дозе от 2 тыс. до 3 тыс.

Преимуществом ГСЖК является их доступность (можно получать в необходимом количестве при наличии достаточного числа беременных кобыл). Но они медленно инактивируются в организме, период полураспада гонадотропинов в организме коров составляет 6 дней, и их еще можно обнаружить в крови через 10 дней после введения. Гонадотропины после овуляции оказывают вредное влияние на качество развивающихся оплодотворенных яйцеклеток. При этом увеличивается возможность формирования фолликулярных кист яичников. Поэтому были предприняты попытки ограничить действие ГСЖК путем использования сыворотки, содержащей антитела. Антисыворотку к ГСЖК вводят донорам после суперову- ляторной обработки в начале проявления стадии возбуждения полового цикла, но результаты не всегда бывают надежными. Многие авторы считают, что благодаря введению антисыворотки у подопытных животных-доноров увеличивается количество овулирующих фолликулов по сравнению с контрольными животными, существенно уменьшается число фолликулов с кистозной дистрофией, а также наблюдается положительное влияние на оплодотворяемость овулирующих яйцеклеток.

С целью вызывания множественной овуляции можно применять препараты фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). Они дают такую же эффективность, как ГСЖК, но их сложнее получать. Суперовуляцию можно вызывать ФСГ, получаемыми из гипофизов свиней и овец. Эти препараты имеют короткий период активности. Так, период полураспада ФСГ из гипофизов овец составляет 5 ч. По этой причине их назначают в снижающейся дозировке по 2 раза в день в течение 5 дней (первый и второй дни утром и вечером по 5 мг, третий день — соответственно по 4 мг, четвертый — по 3 мг и пятый — по 2 мг), всего Юдоз. Вводить ФСГ обычно начинают с 9-го по 11 -й день полового цикла.

Ряд авторов сообщают, что после применения препаратов ФСГ получают больше зародышей, пригодных к пересадке, чем при использовании ГСЖК.

Некоторые авторы предлагают при использовании ФСГ упростить стандартную схему обработки и вместо двукратных проводить одноразовые инъекции в течение 5 дней. Этим достигается снижение затрат труда, уменьшение стрессорных влияний обработок на донора и повышается количество овуляций с 6,4 до 8,1.

При различных режимах обработки число овулировавших фолликулов у разных животных очень сильно варьирует. Это зависит от индивидуальных особенностей животных и многих других факторов. Описаны различия в чувствительности к ГСЖК у животных отдельных пород и линий крупного рогатого скота. При этом молочные породы проявляют меньшую реакцию, чем мясные. У телок наблюдается более высокая реакция, чем у коров.

Коровы-доноры должны всегда получать полноценный рацион. Имеются четкие доказательства, что голодание коров-доноров в период после введения ГСЖК заметно уменьшает количество овуляций. Исследования с помощью лапароскопа показали, что множественная овуляция у коров и телок является длительным процессом и после общепринятой обработки (ГСЖК, ФСГ + + ПГФ2) продолжается 24 ч и более. Если в одном яичнике происходит более 9—

10 овуляций, то он настолько увели чивается, что фимбрии яйцепровода неспособны его окружить и часть яйцеклеток может попасть в брюшную полость. Имеются предположения, что использование предварительного анализа индивидуального гормонального фона у конкретных животных позволит лучше понять причины нарушений при супер- овуляторной реакции и, модифицируя гормональные обработки с учетом физиологического состояния ? животных, можно уменьшить вариабельность в количестве овуляций и снизить число нереагирующих животных.

ОСЕМЕНЕНИЕ ДОНОРОВ

Для их осеменения берут сперму выдающихся быков-производителей, проверенных по качеству потомства и признанных улучшателями продуктивности. Имеются доказательства, что при использовании некоторых быков достигается более высокая степень оплодотворяемое™ коров-доноров, поэтому следует оценивать быков и по данному показателю. Отбор быков и работу со спермой проводят с соблюдением ветеринарно-санитарных правил и согласно действующей инструкции по искусственному осеменению коров и телок. После гормональной обработки доноров у них с помощью быков-пробников выявляют половую охоту не менее 2 раз в день. Примерно у 10—12% животных признаки стадии возбуждения полового цикла не проявляются. Осеменение животных, у которых обнаружена охота, проводят несколько раз с 12-часовыми интервалами до ее окончания, иногда его повторяют 3—4 раза. В каждой дозе спермы должно быть не менее 40— 50 млн живых подвижных спермиев. Чаще используют способ осеменения с ректальной фиксацией шейки матки, сперму вводят в ее канал.

Некоторые зарубежные авторы предлагают вводить сперму в полость тела матки. Имеются также рекомендации вводить одну порцию спермы в левый, а вторую — в правый рог матки. Свежие спермии сохраняют жизнеспособность в половых путях самок дольше, чем замороженные и оттаянные. Поэтому при использовании свежей спермы в течение охоты можно проводить 1—2 осеменения. При этом достигается более высокая степень оплодотворяемости. Нецелесообразно осеменять доноров в отдаленные сроки после окончания охоты, поскольку в дальнейшем это может оказывать вредное влияние на степень извлечения пригодных к пересадке зародышей.